Rozbor moči a sliny pro tuberkulózu

Rozmanitost různých rozborů tuberkulózy není vysvětlitelná snadností diagnostiky této nemoci, ale její zákeřností. Lidé se od nepaměti snažil najít způsob, jak identifikovat souchotin v počátečních fázích, a proto provedli různé studie na pacientech, z nichž některé jsou skutečně zakořenila jako metody diagnostiky onemocnění nebo jako prostředek pro sledování procesu nemoci.

Co jsou testy moči a slin?

Bac analýza tuberkulózy slin a moči se provádí za účelem zjištění přítomnosti agens v těle. Účelem těchto studií je ovšem potvrdit onemocnění s existujícími příznaky spíše než najít, protože pro primární preventivní diagnózu existuje řada dalších spolehlivějších metod.

Kromě toho, moči nebo sputa a analýzu slin na TB lékaři mohou provádět k identifikaci přechodu uzavřenou formu nemoci do otevřených, který je charakterizován tím, uvolnění velkého množství bakterií s přírodními tekutiny a výkaly pacienta, a proto se velmi epidemiologicky nebezpečná pro ostatní.

Zkouška moči

Odpověď na otázku, jak předložit test moči na tuberkulózu, je poměrně jednoduchá. Moč pro tuberkulózu se shromažďuje jako jakákoli obecná analýza této tekutiny, známá všem od dětství:

  1. První část moči je třeba shromažďovat ráno, zatímco je shromažďována pouze střední část a nikoliv ta, která opouští první nebo poslední.
  2. Před sběrem je nutné důkladně umýt oba kontejnery a samotné urino-genitální orgány, aby se do sklenice nedostalo nic nadbytečného: bílkoviny, krve, mikrobů atd.
  3. Požadované množství tekutiny pro studium je pouze 50-100 ml, takže nevedejte pololitrovou moč.

Přípravek OAM lze užívat v libovolné klinice, nicméně pouze speciální laboratoře mohou najít tuberkulózní tuberkulózy, které nejsou dostupné v každé lokalitě v Rusku. Normální výsledky tohoto průzkumu vypadají takto:

  1. Barva: žlutá, slunečně žlutá nebo sláma.
  2. Transparentnost: vysoká.
  3. Vůně: ostrá.
  4. Reakční pH: 4-7.
  5. Hustota: 1012-1022 g / l.
  6. Protein: ne, ale někdy je přípustná hodnota až 0,033 g / l.
  7. Glukóza: až 0,8 mmol / l.
  8. Ketonová těla: ne.
  9. Bilirubin: ne.
  10. Urolilinogen: 5 až 10 mg / l.
  11. Hemoglobin: ne.
  12. Erytrocyty: u žen je maximální přípustná hodnota až tři a u mužů až 1 v zorném poli.
  13. Leukocyty: přípustný počet těl v zorném poli pro 6 žen a až 3 pro muže.
  14. Epitelové buňky: až 10 ks. v dohledu.
  15. Válce: ne nebo existují jednotlivé hyaliny.
  16. Sůl: ne.
  17. Bakterie: ne.
  18. Houby: ne.
  19. Paraziti: ne, ale pokud ano, pak to není strašné: právě v tomto případě se provádí terapie anthelmintickými léky.

Indikátory OAM pro tuberkulózu obvykle zůstávají stejné. Výjimkou jsou pouze akutní formy nemoci, kdy je moč změněn v důsledku abnormalit ve vnitřních orgánech a v chronických lézí plic nebo kostí, když se může provést test být příznaky amyloidózy - poruch metabolismu proteinů, ve kterém se protein být přítomny v výsledky průzkumu.

Výjimkou je tuberkulóza ledvin nebo močových cest - nejčastější mimoplicní onemocnění způsobené přenosem infekce krevního řečiště, tuberkulóza je na analýzu moči se velmi liší. V tomto případě jsou v něm zaznamenány následující jevy:

  • ostře kyselá přetrvávající reakce;
  • leucocyturia - bílé krvinky v moči;
  • proteinurie - protein v moči;
  • erythrocyturia - krev v moči;
  • pyurie - pusť do moči.

Také v akutních onemocnění nebo při tuberkulóze ledvin a močových cest infekcí v moči je přítomna bacily aktivní forma činidla, které je určeno barvením Ziehl-Nelson.

Vyšetření slin

Ve skutečnosti LHC nevytváří test na tuberkulózu. Analýza slin, poměrně často ignorantní lidé nazývají vyšetření sputu pro tuberkulózu. Namísto sputum rozbor slin na TBC lze provést pouze v případě velmi malých novorozenců, kteří nejsou schopni plivat kapalné vykašlávání, protože se automaticky polyká jednou bezprostředně po vykašlávání. Nicméně v tomto případě lékaři jednoduše provedou biopsii tkání nebo zabaví plicní tajemství pomocí sondy, spíše než se otáčet slinami.

Analýza sputa na patogenu se také provádí pomocí metody Tsilya-Nelson. V tomto případě, kromě bacily jsou některé příznaky plicní patologie vidět pouhým okem: vláknité odlitky, hnis, krev, kousky tkáně, a tzv čočka - velké inkluze špendlíkové hlavičky nebo méně kruhového tvaru, uvnitř které má obvykle velký počet bacilů.

Ziehl-Nelsonova metoda barvení

Způsob barvení Ziehl-Nelson na bázi kyseliny odporu Mycobacterium tuberculosis, který může být barevný pouze na tepelném zpracování. V době této studie, tělesné tkáni, sputum, moč, krev, nebo jiné látky, analýza, která je nezbytná přítomnost Úřadu ponechat v příznivé prostředí pro osivo k množení bakterií, pokud tam jsou, samozřejmě, a potom se zahřívá a obarví. Poté se vše udržuje v kyselině až do zbarvení a opět barva již není zahřívána v jiné barvě. Výsledkem je, že MOP je poměrně snadné zjistit, jak jsou barvy první nátěr a dobrý vyniknout.

Poznámkový blok z fthisiatrician - tuberkulóza

Všechno, co chcete vědět o tuberkulóze

Testy na tuberkulózu v krvi a moči

V.A. Koshechkin, Z.A. Ivanova

Prvky červené krve, zpravidla malá změna v tuberkulóze. Pouze po akutní ztrátě krve z plic nebo střev může dojít k anémii. Mírný pokles hladiny hemoglobinu lze pozorovat u chronických forem fibro-kavernózní plicní tuberkulózy.

Jedním z ukazatelů aktivity tuberkulózy je ESR (sedimentace erytrocytů). Zrychlená ESR koreluje nejen s aktivitou a rozsahem současného čerstvého procesu, ale také s exacerbací chronických, zvláště fibrous-kavernózních procesů.

Elementy leukocytární frakce krve reagovat aktivněji na proces tuberkulózy.
Obvykle existují tři fáze změn v leukocytární frakci krve, které souvisejí s povahou lézí plicní tuberkulózy.
1. Neutrofilní fáze boje. V krvi se zvyšuje podíl neutrofilů, což vede k posunu vzorce doleva. Eosinofily chybějí, počet lymfocytů a monocytů je snížen.
2. Monocytární fáze - Překonání infekce. V krvi se zvyšuje počet lymfocytů, krevní vzorec je posunut doleva, počet neutrofilů je snížen, jednotlivé eozinofily jsou detekovány.
3. Obnova fáze. Podíl lymfocytů a eozinofilů se zvyšuje. Krevní obraz se postupně normalizuje.
Toto oddělení fází odráží pouze celkovou krevní reakci.

Jaderný posun neutrofilů v tuberkulóze
Kromě kvantitativní skupiny má neutrofilní skupina také kvalitativní charakteristiku, která je mnohem tenčí a dřívější indikuje různé patologické procesy.

Tuberkulóza dospělých je obvykle sekundární proces, nejčastěji způsobuje v krvi pouze zvýšení neutrofilů. U výrazných infiltračně-pneumonických forem a jevů rozpadu plicních tkání je posun neutrofilů doleva poměrně odlišný a může dosahovat až 20-30% bodnutí.

Plicní infiltrát se nerozpadá a focální formy tuberkulózy během jejich první detekce nebo exacerbace při subfebrilní teplotě a málo vyjádřené funkční poruchy poskytují méně výrazný posun. Současně zbývající prvky hemogramu nemohou vůbec zjistit abnormality. Důkladné stanovení jaderného posunu je proto zvláště důležité při tuberkulóze.

Doktrínu jaderného posunu neutrofilů podpořil Arnet (1905) na základě studie krve v různých infekcích, včetně tuberkulózy.

Při obtížných výpočtech s četnými náčrty si Arnet všiml jisté pravidelnosti konfigurace neutrofilních jader.

Krev zdravé osoby obsahuje:

  • 5% neutrofilů s nezředěným krkem, nerozdělené jádro (1. třída);
  • 35% neutrofilů se dvěma segmenty spojenými nitlivým zúžením (třída II);
  • 41% neutrofilů se třemi segmenty (stupeň III);
  • 17% neutrofilů se čtyřmi segmenty (stupeň IV);
  • 2% neutrofilů s pěti segmenty (třída V).

Kromě segmentace jádra Arnet také vzal v úvahu svůj tvar. Takže pro první třídu vybral několik podtříd o stupni deprese nesegmentovaného jádra. Zbývající třídy jsou rozděleny do podtřídy v závislosti na tvaru segmentů.

Pokud jsou infekce úměrné jejich závažnosti, počet více segmentovaných forem se snižuje, počet segmentů s malým počtem segmentů (2-3 segmenty) a nesegmentovaných (relativně mladých buněk) se zvyšuje.

V systému Arnet je počet nesegmentovaných neutrofilů třídy I znázorněn vlevo; vpravo je počet buněk třídy II, pak třídy III atd. Následkem toho s rostoucími nesegmentovanými a lehce segmentovanými formami se zvyšuje počet buněk na levé straně obvodu a dochází k "levému posunu".

Analýza moči
Vylučování moči u pacientů s tuberkulózou je téměř normální. Patologické změny v moči mohou být, pokud tuberkulóza postihuje ledviny nebo močové cesty.
Pacienti s chronickými formami plicní tuberkulózy nebo kostí mohou mít známky amyloidózy.

3.7 Analýza krve a moči.

Prvky červené krve se zpravidla nemění s tuberkulózou. Pouze po akutní ztrátě krve z plic nebo střev může dojít k anémii. Mírný pokles hladiny hemoglobinu lze pozorovat u chronických forem fibro-kavernózní plicní tuberkulózy. Jedním z ukazatelů aktivity tuberkulózy je ESR (sedimentace erytrocytů). Zrychlená ESR koreluje nejen s aktivitou a rozsahem současného čerstvého procesu, ale také s exacerbací chronických, zvláště fibrous-kavernózních procesů. Prvky leukocytové frakce krve reagují aktivněji na tuberkulózu.

Obvykle jsou tři fáze změn leukocytové frakce krve spojeny s povahou lézí v plicní tuberkulóze:

  1. Neutrofilní - fáze boje. V krvi se zvyšuje podíl neutrofilů, což vede k posunu krevního vzorku doleva. Eosinofily chybějí, počet lymfocytů a monocytů je snížen. Lymfopenie je charakteristická pro progresivní formy tuberkulózy.
  2. Fáze monocytů je překonání infekce. V krvi se zvyšuje počet lymfocytů, krevní vzorec je posunut doleva, počet neutrofilů je snížen, jednotlivé eozinofily jsou detekovány.
  3. Fáze obnovy. Podíl lymfocytů a eozinofilů se zvyšuje. Krevní obraz se postupně normalizuje.

Toto rozdělení na fáze odráží pouze celkové reakce v krvi, které neodrážejí složitost krevních reakcí na chronickou tuberkulózní infekci.

Jaderný posun neutrofilů v tuberkulóze.
Kromě kvantitativní skupiny má neutrofilní skupina také kvalitativní charakteristiku, která je mnohem tenčí a dřívější indikuje různé patologické procesy. Tuberkulóza dospělých, obvykle po primárním procesu, nejčastěji způsobuje v krvi pouze zvýšení neutrofilů. Když je exprimován infiltrativní formy a plicní tkáň rozpad jevy neutrofily plicní detekován zcela jasně směny levé a může dosáhnout 20-30% stab.

Plicní infiltrace bez rozkladu a fokální TB během prvního exacerbace nebo identifikace při teplotě subfebrile a jen patrné funkční poruchy poskytují méně výrazný posun. V tomto případě zbývající prvky hemogramu nemohou úplně odchylovat od normy. Důkladné určení nukleárního posunu má proto diagnostickou významnost při tuberkulóze.
Doktrína jaderného posunu neutrofilů byla posílena Arnethem na základě studie krve pro různé infekce a zejména pro tuberkulózu. Při obtížných výpočtech s četnými náčrty si Arnet všiml jisté pravidelnosti konfigurace neutrofilních jader. V krvi zdravé osoby jsou neutrofily s nezředěnými konstrikcemi, nerozdělené jádro (třída I) 5%; neutrofily se dvěma segmenty spojenými filiformním zúžením (třída II), 35%, III. třída 41%, IV. třída 17% a třída V 2%. Pokud jsou infekce úměrné jejich závažnosti, počet mnoha segmentovaných forem se snižuje, počet malých segmentovaných (2-3 segmentů) a nesegmentovaných forem se zvyšuje. V systému Arnet je počet nesegmentovaných neutrofilů napsán vlevo; se nachází na pravé straně počet buněk třídy II, třída III a pak t. d. Tím, že zvýšení počtu nesegmentované a levá strana buněčných obvodů formy segmentované málo zvýšenou a tam je „levý shift“.

Známky procesu tuberkulózy, kromě změn hemogramu, jsou hyponatrémie. Jedná se o nejcharakterističtější metabolický posun. Příčinou hyponatrémie je vývoj plicního tkáně postiženého tuberkulózou antidiuretickou hormonální látkou. Obzvláště intenzivně se tato látka vyrábí v období rozšířených cézodestruktivních forem.

Analýza moči.
Vylučování moči u pacientů s tuberkulózou je téměř normální. Patologické změny v moči mohou být, pokud tuberkulóza postihuje ledviny nebo močové cesty. V moči jsou nalezeny bílkoviny, bílé krvinky, MBT. U pacientů s chronickými formami plicní tuberkulózy nebo kostí lze identifikovat příznaky amyloidózy (přetrvávající preteinurie, makrohematurie).

Diagnostika tuberkulózy pomocí analýzy krve a moči

Prvky červené krve se zpravidla nemění s tuberkulózou. Pouze po akutní ztrátě krve z plic nebo střev může dojít k anémii. Mírný pokles hladiny hemoglobinu lze pozorovat u chronických forem fibro-kavernózní plicní tuberkulózy.

Jedním z ukazatelů aktivity tuberkulózy je ESR (sedimentace erytrocytů). Zrychlená ESR koreluje nejen s aktivitou a rozsahem současného čerstvého procesu, ale také s exacerbací chronických, zejména fibro-kavernózních procesů.

Prvky leukocytové frakce krve reagují aktivněji na tuberkulózu.

Obvykle existují tři fáze změn v leukocytární frakci krve, které souvisejí s povahou lézí plicní tuberkulózy.

  1. Neutrofilní fáze boje. V krvi se zvyšuje podíl neutrofilů, což vede k posunu vzorce doleva. Eosinofily chybějí, počet lymfocytů a monocytů je snížen.
  2. Fáze monocytů je překonání infekce. V krvi se zvyšuje počet lymfocytů, krevní vzorec je posunut doleva, počet neutrofilů je snížen, jednotlivé eozinofily jsou detekovány.
  3. Fáze obnovy. Podíl lymfocytů a eozinofilů se zvyšuje. Krevní obraz se postupně normalizuje.

Toto oddělení fází odráží pouze celkovou krevní reakci.

Jaderný posun neutrofilů v tuberkulóze

Kromě kvantitativní skupiny má neutrofilní skupina také kvalitativní charakteristiku, která je mnohem tenčí a dřívější indikuje různé patologické procesy.

Tuberkulóza dospělých je obvykle sekundární proces, nejčastěji způsobuje v krvi pouze zvýšení neutrofilů. U výrazných infiltračně-pneumonických forem a jevů rozpadu plicních tkání je posun neutrofilů doleva poměrně odlišný a může dosahovat až 20-30% bodnutí.

Plicní infiltrát se nerozpadá a focální formy tuberkulózy během jejich první detekce nebo exacerbace při subfebrilní teplotě a málo vyjádřené funkční poruchy poskytují méně výrazný posun. Současně zbývající prvky hemogramu nemohou vůbec zjistit abnormality. Důkladné stanovení jaderného posunu je proto zvláště důležité při tuberkulóze.

Doktrínu jaderného posunu neutrofilů podpořil Arnet (1905) na základě studie krve v různých infekcích, včetně tuberkulózy.

Při obtížných výpočtech s četnými náčrty si Arnet všiml jisté pravidelnosti konfigurace neutrofilních jader. Krev zdravé osoby obsahuje:

  • 5% neutrofilů s nezředěným krkem, nerozdělené jádro (1. třída);
  • 35% neutrofilů se dvěma segmenty spojenými nitlivým zúžením (třída II);
  • 41% neutrofilů se třemi segmenty (stupeň III);
  • 17% neutrofilů se čtyřmi segmenty (stupeň IV);
  • 2% neutrofilů s pěti segmenty (třída V).

Kromě segmentace jádra Arnet také vzal v úvahu svůj tvar. Takže pro tuto třídu vytyčil několik podtříd na stupni deprese nesegmentovaného jádra. Zbývající třídy jsou rozděleny do podtřídy v závislosti na tvaru segmentů.

Pokud jsou infekce úměrné jejich závažnosti, počet více segmentových forem se snižuje, počet segmentů s nízkým počtem segmentů (2-3 segmenty) a nesegmentovaných (relativně mladých buněk) se zvyšuje. V systému Arnet je počet nesegmentovaných neutrofilů třídy I uveden vlevo; vpravo je počet buněk pak t. d. V důsledku toho, zvýšení non-segmentového tvaru a počtu malosegmentirovannyh levá strana zvětšuje obvod buněk třídy II, třída III a a tam je „levý shift“.

Analýza moči

Vylučování moči u pacientů s tuberkulózou je téměř normální. Patologické změny v moči mohou být, pokud tuberkulóza postihuje ledviny nebo močové cesty.

Pacienti s chronickými formami plicní tuberkulózy nebo kostí mohou mít známky amyloidózy.

35. Diagnostická hodnota studie krve a moči u pacientů s tuberkulózou.

Krevní test Hemoglobin a erytrocyty ve většině případů zůstávají nezměněny, s výjimkou případů spojených s akutní ztrátou krve. Ukazatel, který svědčí o přítomnosti aktivního tuberkulárního procesu, je rychlost sedimentace erytrocytů. Zrychlená ESR je charakteristická nejen pro čerstvou aktivní tuberkulózu, ale také pro exacerbaci chronického procesu. Zbývající parametry krevního testu se velmi liší v závislosti na povaze poškození plic. Změny periferních parametrů. krev s tuberk. žádná specificita, ale hemogram pomáhá diagnostikovat. fáze hrnce. zpracovávat a hodnotit závažnost. jeho toku. Lidé, kteří byli vyšetřeni na léčbu tuberkulózy a tuberkulózy. přiděleno obscheklin. krevní test s definicí ESR, obsahující eterr. a leukemie, koncentrace hemoglobinu a počítání leukocytového vzorce. Pacienti s tuberkulózou v přítomnosti pyémie se doporučují. určení počtu retikulocytů pro hodnocení regenerátů. schopnost kostní dřeně v diferenciálně-diagnostických případech - obsah krevních destiček. Změny v hematologii. indikátory na jedné straně závisí na lokalizaci, povaze a závažnosti inf. proces, na straně druhé - o stavu organismu, jeho kompenzačních rezervách. Hemogram har. spíše fáze procesu než jeho klín. tvar. Například u pacientů s rozšířenou destruktivní formou tuberkulózy, s kompenzací pro proces a nepřítomností čerstvého zánětu. změny ve vzorcích krve mohou být normou. Exacerbace tub. proces je obvykle doprovázen bodavým posunem neutrofilů, lymfopenií a zvýšením ESR. Obecně. počet bílých krvinek. většina pacientů je v normálních mezích. Pouze akutní a závažný průběh je charakterizován zvýšením obsahu leukocytů v krvi na 15 x 109 / l. Neutrofilní posun leukocytového vzorce doleva se stává významnější. Se závažností onemocnění (zejména s miliární tuberkulózou) se může objevit leukemidní reakce myeloidního typu. Zástava akutního procesu způsobuje normalizaci indikovaných změn, výskyt lymfocytózy. Neutropenie a lymfocytóza mohou být pozorovány u chronické hematogenně diseminované a fokální tuberkulózy.

Analýza moči. Při analýze moči u pacienta s plicní tuberkulózou nedochází k významným abnormalitám. Změny se objevují pouze u tuberkulózních lézí ledvin a močových cest. Rutinní analýza moči pro tuberkulózu je nutná nejen v případě podezření na poškození ledvin. V druhém. on je jediný. pro včasnou diagnózu. Trvalá přítomnost hnisu v moči, a co je nejdůležitější, tuba. bakterie, samozřejmě, ukazuje na tubu. ledviny. Někdy je však nutné. Vyřízeno. moč pro detekci patologa. najde; tak pro některé. formy tuberkulózy. měsíční analýza moči (diseminované formy, komplikovaný primární komplex). Malé změny v moči ve formě stop bílkovin, jednotlivé. leukocyty a čerstvé erytrocyty mohou být pravidelně detekovány jako fenomén obecné intoxikace. Konečně některé reakce s močí ukazují závažnost procesu. Mezi nimi je vzhled diagorovy reakce ve zobecnění. formy tuberkulózy, zejména s miliární tuberkulózou.

Nepochybně má prognostická hodnota v průběhu tuberkulózy urochromogenní účinek. Je to velmi jednoduché a to je jeho velká výhoda. Proizv. další. cesta: odfiltrujte moč a 10krát ji zředte. Nalijte do dvou zkumavek, jedna dávka jako kontrola a druhá přidá roztok manganistanu draselného 1: 1000. S pozitivní reakcí v trubici se získá ostrou barvení na kanárce, což je velmi jasně odhaleno ve srovnání s kontrolou. Je třeba brát v úvahu pouze dobře vyjádřené. barvení. Mechanismem reakce je, že manganistan draselný oxiduje v moči bezbarvý urochromogen, což je významně zvýšené progresivní tuberkulózou.

Jaké jsou testy na plicní tuberkulózu?

Všem pacientům jsou podávány laboratorní testy. Vzhledem k tomu, že patologie je nakažlivá vůči ostatním, včasné studium biologického materiálu přispívá k přesnosti diagnózy a pomáhá sledovat průběh léčby.

Seznam laboratorních testů pro plicní tuberkulózu

Seznam testů na tuberkulózu

Seznam povinných testů na plicní tuberkulózu je následující:

  • vyšetření sputa - v přítomnosti jeskyní, těl rýže, bílkovin, elastických vláken, vápenatých solí;
  • analýza exsudátu - vykazuje neutrofily a endotelové buňky s převahou leukocytů;
  • analýza bronchoalveolární laváže vykazuje snížený počet alveolárních makrofág s prudkým nárůstem neutrofilů v aktivním průběhu tuberkulózního procesu a v neaktivním toku jsou makrofágové indexy mírně zvýšené;
  • sérologické testy, nebo enzýmové imunoanalýzy, aby se stanovily sérové ​​imunoglobuliny pro mykobakteriální antigeny. Poměr diagnostického titru protilátek k příčinám onemocnění převyšuje hodnotu 1: 8.

Co ukazují výsledky krevních testů?

Díky biochemické analýze krve při plicní tuberkulóze mají odborníci možnost stanovit a řídit změny v proteinu a jeho frakcích v krevním séru. To určuje formu a stupeň onemocnění. Hladiny kyseliny močové, mědi, cholesterolu a lysozymu jsou překročeny. Byla pozorována aktivita kreatinkinázy a enzymu konvertujícího angiotensin. Vzhledem k nižšímu pH a zvýšenému pCO2 se rozvíjí respirační acidóza.

Pokud jde o parametry hemoglobinu, jejich snížení, které vede k rozvoji anémie, není typické pro proces tuberkulózy.

Analýza moči u tuberkulózních pacientů

Je test moči na plicní tuberkulózu?

Vylučování moči u tuberkulózních pacientů zůstává normální. Patologické změny se obvykle vyskytují, když se procesy tuberkulózy účastní ledvin a močových cest. U pacientů s chronickým onemocněním může být během studie zjištěna známka amyloidózy.

Co ukazuje analýza moči v plicní tuberkulóze, jaké informace mohou naznačovat vývoj patologického procesu v těle?

  1. Hustota je 1,015 - 1,025.
  2. Jediná přítomnost červených krvinek je povolena u dětí - ne více než 5.
  3. Leukocyty by neměly být více než 2 jednotky, u žen a dívek - až 5 jednotek.
  4. Hodnoty soli by neměly být významné.
  5. Přípustná hodnota plochého epitelu je až 5 jednotek.

Co ukáže krevní test na plicní tuberkulózu

Tuberkulóza je nebezpečné a komplikované onemocnění při léčbě. Účinnost léčby závisí na tom, jak byla včas odhalena. Nikdo není imunní vůči infekci, absolutně každý může být nemocný - dospělí, děti, starší lidé.

Neexistuje nezbytná včasná léčba uzavřená forma jde do nebezpečné otevřít, proto je diagnostika v raných stádiích onemocnění velmi důležitá a to lze dosáhnout pravidelnými a komplexními průzkumy.

V tomto článku budeme zvažovat různé metody pro diagnostiku tohoto plicního onemocnění a také se budeme snažit zjistit, který krevní test na plicní tuberkulózu je nejspolehlivější a nejúčinnější.

Pokud je potřeba prověřit tuberkulózu

Průzkum je tedy nezbytný, když:

  • kontakty s nosiči onemocnění;
  • obecná slabost;
  • snížení hmotnosti;
  • zvýšení teploty večer;
  • chronický kašel.

Zvláště důležité je stanovit přítomnost tuberkulózy v dětství včas, protože u dětí je velmi pravděpodobné, že infekce způsobí další patologické procesy v těle.

Důležité! Jedním z preventivních opatření je očkování BCG na 4 dny život dítě a v 7 let stará věku. Tělo dítěte je slabší než dospělý, takže je důležité ho chránit před infekcí a očkovat.

Studie o podezření na tuberkulózu

Tuberkulózu lze identifikovat několika způsoby.


Foto 1. Fragment rentgenu hrudníku pacienta s tuberkulózou. Fluorografie je jednou z nejspolehlivějších metod diagnostiky tohoto onemocnění, ale je nejúčinnější v oddělení s ostatními. Například podrobný krevní test prokáže tuberkulózu i v rané fázi.

  1. Rentgenové vyšetření.Vyhodnocení stupně poškození plic pomůže fluorografii. Nicméně je třeba mít na paměti, že počáteční fáze vývoje onemocnění nebudou na rentgenu vidět. Zkouška by měla být komplexní. Pro úplnější vyšetření musí být pacientova plica fotografována jak zepředu, tak zezadu.
  2. Tuberculin test. Při vyšetření dětí se nejčastěji používá tuberkulinový test (Mantouxova reakce). Tuberculin je směs bílkovin izolovaných z mrtvých patogenů. Zavedení léku pod kůži způsobuje reakci na imunitu, která se projevuje různými způsoby. Pokud v těle nejsou žádné patogeny, pak pár dní po injekci bude sotva viditelná stopa. Pokud se místo vpichu vzorku nebo tvorba vředu nafoukne, pravděpodobnost infekce pacienta je vysoká.

Důležité! Mantouxová reakce neumožňuje stanovit přítomnost tuberkulózy se 100% pravděpodobností, ale pomůže určit rizikovou skupinu této nemoci. S opatrností je vhodné vyzkoušet ty, kteří trpí alergiemi. Zavedení složení těla může reagovat nepředvídatelným způsobem.

  1. Výzkummoča krev. Výsledky pomáhají zjistit stopy patogenu. Přiřazena k určení konečné diagnózy a rozsahu nemoci.
  2. Složeníhlen. Přítomnost bakterie mycobacterium tuberculosis umožňuje stanovení a studium sputa. Materiál vykazuje nadbytek normy bílkoviny, která ji odlišuje od bronchiálního sputa, stejně jako patogeny infekce.

Je možné stanovit tuberkulózu obecným vyšetřením krve

Složení erytrocyty (červené krvinky) v přítomnosti bakterií se mění nevýznamně. Akutní střevní nebo plicní krvácení vyvolávají anémie, významné snížení hemoglobinu.

Existují lidé, kteří pochybují o tom, zda může být tuberkulóza stanovena analýzou krve. Ve skutečnosti je obecná analýza schopna identifikovat vývoj zánětlivých a patologických procesů v těle zvýšená míra ESR. Zvýšený index indikuje nejen aktivitu a trvání současného zánětu, ale také exacerbaci chronické, zejména v konečné fázi onemocnění.


Foto 2. Lékař provádí postup pro odběr krve z žíly pacienta pomocí injekční stříkačky. Poté se provede krevní test s tuberkulózou, jejíž indikátory indikují zánětlivé procesy.

Důležité! Úroveň ESR může být zaměňována s indikátory pro zánět nebo rakovinu plic. V tomto případě je nutné vyšetřit počet eozinofilů (jeden z typů leukocytů). Pokud jsou eozinofily zvětšeny a vzorec leukocytů vykazuje náhlé změny v krevní zkoušce, dochází k tuberkulóze a je vyloučen pneumonií.

Jsou klinické a biochemické krevní testy přesné?

Klinický krevní test na plicní tuberkulózu je často nedostatečný pro diagnostiku tuberkulózní bacilus. Poté je zapotřebí další komplexní vyšetření. Totéž lze říci o biochemickém vyšetření krve. Při tuberkulóze počáteční fáze nebo latentní formy s největší pravděpodobností nezaznamená žádné abnormality. A pouze u akutních forem onemocnění se sníží koeficient albumin-globulin.

Typy krevních testů pro protilátky proti tuberkulóze

Tam jsou přesnější, hlubší než OAK, metody krevního testování, umožňující identifikovat tuberkulózu. Jak zjistit takovými krevními testy, máte nemoc, budeme dále zvažovat.

Stanovení objektivní diagnózy je možné s využitím přístupů polymerázové řetězové reakce (PCR) a enzymová imunotest (ELISA).

Vykazuje ELISA přítomnost tuberkulózy

S pomocí ELISA odhaluje přítomnost patogenů u pacienta. Metoda je vhodná, protože umožňuje současně prozkoumat velké množství vzorků. Má však nízkou citlivost a doporučuje se používat v oblastech s nízkou mírou výskytu.

Jaké změny ukazuje metoda PCR?

Metoda PCR označuje nejproduktivnější. Používá se k detekci onemocnění, určení závažnosti a remisí při léčbě zjištěním DNA mikrobakterií.

PCR se používá pro:

  • detekce progresivního bodnutí Kocha;
  • test na detekci extrapulmonární tuberkulózy;
  • rychlé zřízení lokalizace lokalizace infekce;
  • diagnostika recidivy onemocnění;
  • sledování průběhu léčby.

A to a další vyšetření krve na protilátky proti tuberkulóze jsou považovány za dostatečně spolehlivé. Ale existují i ​​jiné.

Alternativní metody krevního testu

Méně než PCR a ELISA jsou běžné pro detekci patogenních mikrobakterií Testy uvolňování interferonu gama. Může být provedeno místo tuberkulinu. Reakce ukazuje tvorbu gama-interferonu v reakci na zavedení mikrobakterií. Výsledky mohou přesně určit přítomnost infekce.

Další alternativní metoda výzkumu je QuantiFERON-TB Gold. Tato metoda se nejčastěji používá k testování dětí, které mají závažné alergické reakce na tuberkulinový test.

Důležité! Obě metody neumožňují určit stupeň vývoje infekce - aktivní nebo latentní.

Ošetřující lékař určí, který typ krevního testu bude použit. Nejčastěji se studie provádí komplexním způsobem. Analýza krve v latentní formě tuberkulózy obecně nemůže poskytnout výsledky.

Jak jsou výsledky krevních testů dekódovány?

Při interpretaci celkového krevní testu stojí za to věnovat pozornost hladině ESR, hemoglobinu, leukocytů.

Úroveň ESR zdravý člověk bude mít méně než 50 jednotek, přebytek tohoto indikátoru indikuje zánětlivý proces v těle.

Počet leukocytů v krvi pacient s tuberkulózou dosáhne 6 v 10 9 / litr, v akutních a těžkých případech onemocnění - 12-15 až 10 9 / L.

Složení červených krvinek většina pacientů zůstává normální. Nízký hemoglobin je fixován miliárd tuberkulózou, kauzální pneumonií.

Akutní, progresivní a komplikované formy změny nemoci leukogram. V některých případech mírná leukocytózaaž 10 000 až 15 000 bílých krvinek), méně často leukopenie.

Bez ohledu na to, co provedete krevní test na plicní tuberkulózu, dešifrování je práce zkušených odborníků. Pouze oni mohou přesně určit, kolik je spuštěna tuberkulóza, pokud se zjistí. Analýzy ELISA a PCR se dešifrují stejným způsobem. U zvláštních forem je negativní nebo pozitivní výsledek indikován oproti zjištěné infekci.

Druhy testů pro léčbu

Obtížnost léčby spočívá v tom, že se infekce může stát udržitelné na jakýkoli druh antibiotik, zejména v pokročilých stádiích, a také dlouhodobě inkubační období, během něhož není možné infekci určit.

Po identifikaci a předepisování vhodné terapie je proces obnovy sledován v pravidelných intervalech 1-2 krát měsíčně. Pacient dává krve a hlenu.


Foto 3. Lékařský stůl v kanceláři lékaře po odběru sputu od pacienta. Vzorky sputa jsou uzavřeny v plastových zkumavkách a čekají na laboratorní vyšetření.

Obecný krevní test, Mantouxův test, fluorografie lze provést v téměř každém zdravotním středisku, to se děje okamžitě, pokud dojde k podezření. Na základě zjištění terapeut provede závěr o absenci patologické změny v těle nebo dávají pokyny pro další vyšetření v lékárně.

Specializované a přesnější studie probíhají v roce 2006 TB dispenzary, které jsou vybaveny laboratořemi a nezbytnými reagenciemi pro výzkum.

Takže shrnutím výše:

  • tuberkulóza nebezpečné nemoci, což je mimořádně důležité pro včasné zjištění;
  • zvýšení ESR, výpadek, změna v leukogramu poskytnout základ pro odeslání pacienta k dalšímu vyšetření k identifikaci infekce;
  • léčba je prováděna za pomoci antituberkulózních léků; Intenzivní fáze léčby pokračuje až do dosažení pozitivní dynamiky klinických a radiologických ukazatelů.

Užitečné video

Nabízíme sledování videa, které také odpovídá na otázku, zda je možné identifikovat tuberkulózu analýzou krve. Popisuje kvantiferon-test QuantiFERON TB Gold, který ukazuje tuberkulózu v krevní zkoušce pro imunitní odpověď.

Dekódování obecného krevního testu na tuberkulózu u dospělých a dětí

Infekce s tuberkulózní bacilou již není pro člověka věta. Moderní medicína používá účinné nástroje k potlačení tohoto onemocnění, pokud je zjištěna v počáteční fázi. Včas detekovat patologii pomáhají pravidelným preventivním vyšetřením a vyšetřením včetně obecné krevní testy tuberkulózy.

Změna klinického obrazu

Celkový krevní test na plicní tuberkulózu (UAC) nemá žádné specifické projevy. Markery, které hovoří o vývoji tuberkulózy a stanovení fáze onemocnění, neexistují. Ale u nespecifických příznaků lze posoudit skrytý zánětlivý proces a podezření na změny v plicích.

Odchylka erytrocytů od normálu

S pomalou formou nebo lokalizovanou lézí se počet červených krvinek v krvi nemění, ale jejich barva se mění. Úroveň hemoglobinu v červených krvinkách klesá. Tento stav se nazývá hypochromie.

Při významných infiltračních lézích plicní tkáně klinický krevní test ukazuje snížení počtu červených krvinek a pokles jejich velikosti. Objevují se nezralé buňky - retikulocyty, které jsou "prekurzory" červených krvinek. V počáteční fázi tuberkulózy nepřesahuje množství retikulocytů 0,5%.

Těžká anémie je častější u dospělých s pokročilou formou tuberkulózy. V tomto případě se počet retikulocytů zvyšuje na 1% z celkového počtu červených krvinek.

Změna vzorce leukocytů

Leukocyty jako buňky imunitního systému se podílejí na reakci na onemocnění na prvním místě. Obecná analýza krve a studie leukogramů určují přítomnost zánětlivého procesu a jeho fáze.

V nekomplikované uzavřené podobě dochází k významnému zvýšení počtu neutrofilů - bílých krvinek odpovědných za potírání bakteriální infekce. Objevují se promyelocyty - nezralé leukocytární buňky, které se normálně nevyskytují.

Dlouhotrvající a závažná plicní tuberkulóza je doprovázena degenerativními změnami neutrofilů, vznikem patologické granularity. Počet eozinofilů výrazně klesá. Zaznamenává se lymfopenie - snížení počtu lymfocytů. Všechny tyto příznaky naznačují prodloužený zánětlivý proces, doprovázený tvorbou hnisových a nekrotických hmot.

Změna v ESR

K určení tuberkulózy v aktivní fázi pomáhá ESR - indikátor rychlosti sedimentace erytrocytů. Váha červených krvinek a jejich rychlé srážení usnadňuje adheze imunoglobulinů, fibrinogenu. Normálně tyto hladiny v krvi u mužů nepřesahují 10 mm / h, u žen - 15 mm / h. Zrychlení ESR až do 80 mm / h znamená aktivaci zánětlivého procesu v těle.

Vlastnosti indikátorů u dětí

Analýza krve pro tuberkulózu u dítěte se výrazně neliší od změn u dospělého. Dekódování výsledků se provádí pro stejné ukazatele:

  • V počáteční fázi onemocnění se vzorec erytrocytů bezvýznamně změní. Anémie může být zjištěna pouze tehdy, když je forma destruktivní. V ostatních případech zůstává počet červených krvinek nezměněn, zatímco procento nezralých erytrocytů se zvyšuje. Tuberkulóza u dětí může být podezření, pokud je detekován retikulocyt nad 1 ppm.
  • Ukazatele leukocytů také procházejí změnami. Vyvolává leukocytózu - zvýšení celkového počtu bílých krvinek způsobené neutrofily a počet lymfocytů je výrazně snížen. Při normě pro děti starší než 6 let 40% je počet lymfocytů v tuberkulóze nejvýše 20%.

V časných stádiích onemocnění se zvyšuje počet eosinofilů - buněk, které reagují na nástup alergické reakce. Prudký pokles znamená, že proces prochází do aktivní fáze.

  • V dětství ESR nepřesahuje 10 mm / h. Zrychlení na 50 mm / h signalizuje mobilizaci obranyschopnosti těla v boji proti zánětlivému procesu.

U dítěte začíná počáteční fáze onemocnění často bez zjevných symptomů nebo maskování pod ARVI.

Změny závisí na stupni onemocnění

Je možné zjistit přítomnost tuberkulózy pomocí laboratorního vyšetření krve? Bohužel ne. Obecný krevní test na tuberkulózu je schopen detekovat zánětlivý proces pouze v určitých stadiích onemocnění.

  1. Ve stádiu infiltrace lehce reagují leukocyty, ESR se zvyšuje.
  2. Ve fázi rozpadu dochází k výrazným změnám ve vzorcích leukocytů a erytrocytech.
  3. Rozložená forma během analýzy poskytne výraznější zmíněné odchylky.
  4. Když se zánětlivý proces uklidní nebo se zotaví, červená krev se vrátí k normálu, obnoví se počet a poměr leukocytů.
  5. Nebyla zjištěna inaktivní forma plicní tuberkulózy při celkovém vyšetření krve.

Klíčem k úspěšné léčbě je včasné odhalení tuberkulózy a celkový krevní test je metoda, která umožňuje rozpoznat nástup latentního zánětlivého procesu včas. Ačkoli se analýza nepovažuje za specializovanou metodu výzkumu, mohou v krátké době spočítat velké množství lidí. Při identifikaci abnormalit v typickém klinickém obrazu je přiřazena specifická analýza pro tuberkulózu a fluorografii.

Kdo říkal, že není možné vyléčit tuberkulózu?

Byla jste diagnostikována tuberkulóza. Vyplníte všechny lékařské předpisy, ale není tam žádné zotavení. Z hrobu pilulky žalude bolest, sleduje slabost a apatie? Možná je načase, abyste změnili přístup k léčbě.

Lékaři nemohou překonat příčinu vaší nemoci. Přečtěte si příběh Eleny, který dokázal porazit tuberkulózu bez ohledu na to, co dělá. Přečtěte si článek >>

Ukazatele ESR při tuberkulóze

V současné době podle statistiky je tuberkulóza nejčastějším onemocněním lidí. Nejčastěji toto onemocnění postihuje děti a nízkopříjmové segmenty obyvatelstva. Stojí za zmínku, že každý rok se procento nemocných lidí zdvojnásobí. V souvislosti s tím se vyvíjejí nové léky a metody pro léčbu tuberkulózy.

Hlavním faktorem přispívajícím k rozvoji tuberkulózy je snížení imunity, které může být způsobeno znečištěním životního prostředí. Diagnózu této nemoci lze provést pomocí testů a mnoha jinými způsoby.

Analýza krve pro tuberkulózu je hlavním indikátorem pro stanovení onemocnění u lidí. Tuberkulóza je nebezpečné infekční onemocnění. Stojí za zmínku, že v mnohem zanedbatelnějším stádiu je onemocnění velmi obtížné léčit, proto je velmi důležité, aby byla nemoc včas zaznamenána a zahájena řádná léčba v nemocnici.

Způsoby zániku tuberkulózy

Nemoc má mechanismus přenosu kapek vzduchu. Tak může dojít k infekci v důsledku získání patogenu do těla přes sliznici. Kromě toho může být tuberkulóza přenášena z nemocné matky na vyvíjející se plod.

Ve většině případů působí tuberkulóza na dýchací systém. Oddělit extrapulmonární formu onemocnění (ovlivňuje trávicí systém, centrální nervový systém, narušuje vizuální funkci, klouby, urogenitální systém).

Hlavním zdrojem onemocnění je mykobakterium - Kochova hůlka. Ovlivňuje plíce, kůži, kosti a mnoho dalších orgánů. Tuberkulóza může zpravidla vést ke zdravotnímu postižení nebo dokonce ke smrti osoby. Je-li však nemoc diagnostikována co nejdříve, pak je léčebná.

Ukazatele ESR při tuberkulóze

Krevní test na definici tuberkulózy ukazuje klinický průběh zánětlivého procesu. Obvykle je rychlost sedimentace erytrocytů: u mužů 1-10 mm / h u žen 2-15 mm / h.

Příčinný činitel, který se dostává do lidského těla, způsobuje poškození tkání a orgánů různých systémů. Zahrnuje změnu ukazatelů krve. Takže když jsou infikovány tyčinkou, pozoruje se velmi silné zvýšení rychlosti sedimentace erytrocytů. Také počet bílých krvinek se zvyšuje, protože zánětlivé procesy probíhají v těle.
Tuberkulóza zpravidla nezpůsobuje významné změny erytrocytů. Vývoj malé anémie a nízkého hemoglobinu se může vyvinout pouze se signifikantní ztrátou krve. Proto je tuberkulóza doprovázena přebytkem ESR, který je mnohem vyšší než normální hodnota.

Symptomy

Mezi hlavní příznaky tuberkulózy patří:

  1. Zvýšená tělesná teplota;
  2. Noční pocení;
  3. Výskyt dechu;
  4. Suchý, silný kašel s hlenem (mohou se vyskytovat krevní řasy);
  5. Obecná únava;
  6. Ostrý úbytek hmotnosti;
  7. Rychlá únava;
  8. Letargie;
  9. Agresivita;
  10. Nedostatek chuti k jídlu;
  11. Bolest v hrudi.

Děti, na rozdíl od dospělých, jsou nejvíce náchylné k infekci tuberkulózou. Proto je nutné pravidelně vyšetřovat své dítě a provést test k identifikaci hůlku Kocha. Včasná diagnóza umožňuje dosáhnout pozitivního výsledku bez vážných následků.

Někteří lidé mají silný imunitní systém. V tomto případě se symptomy onemocnění začínají objevovat až v pozdních stadiích. S oslabenou imunitou se na počátku onemocnění objevují příznaky.
Tuberkulóza se rozvíjí pomalu a postupně:

  • Primární formulář.
    Vyvíjí se okamžitě po infekci. Hlavními příznaky v této fázi jsou zvětšení lymfatických uzlin.
  • Latentní (skrytá forma).
    Nástup onemocnění je charakterizován nepřítomností příznaků. Dále se objevují ve formě specifických bolestí při dýchání a kašli, nedostatku chuti k jídlu, nadměrného pocení, rychlé únavy. Taková forma může být považována za neinfekční.
  • Otevřete formulář.
    Nejzávažnější forma onemocnění. Pro léčbu je nutné ochránit nemocného před ostatními v uzavřených zdravotnických zařízeních. To je nezbytné pro zajištění bezpečnosti pro okolní lidi.
  • Sekundární forma.
    Je pozorován v důsledku opakované infekce.

Diagnostika tuberkulózy

Detekce onemocnění je komplikována vzhledem k podobnosti prvních příznaků s chronickou bronchitidou. Vedoucí úlohu při diagnostice tuberkulózy hraje včasné podávání testů od potenciálních pacientů. Takže pokud je pacient podezřelý z tuberkulózy, vyšetření sputa se provádí. Za tímto účelem se během dne odebírá sputa a odešle do laboratoře k detekci mykobakterií.

Je třeba poznamenat, že diagnóza tuberkulózy má další metody pro vyšetření pacientů.

Nejúčinnější způsoby diagnostiky onemocnění jsou:

  1. B / x krevní test;
  2. Analýza moči;
  3. Analýza sputu;
  4. Mantoux test, Pirke;
  5. CT scan (počítačová tomografie);
  6. Sérologické vyšetření krve (ELISA, PCR);
  7. Bronchoskopie;
  8. Biopsie;
  9. Pleurální punkce;
  10. Fluorografie;
  11. Fluoroskopie.

Je třeba poznamenat, že tuberkulóza je doprovázena zvýšením koncentrace cholesterolu, lysozymu, kyseliny močové a Cu v séru. Na tomto základě mohou být všechny změny v tuberkulóze velmi specifické.

Každá forma onemocnění je charakterizována průtokem, závažností, diagnózou a léčbou. Proto, když se objeví první příznaky, měli byste se okamžitě poradit s lékařem a neměl by se léčit sám. Protože situaci můžete pouze zhoršit a zhoršit svůj stav.

V současné době existuje mnoho léků, které účinně bojují proti původci tuberkulózy. Vedoucí úlohu při ozdravění osoby hraje včasná diagnóza a kompetentní léčba. Celkový stav pacienta závisí také na procesu obnovy po onemocnění. Pokud jsou tedy dodržovány všechny lékařské doporučení, může se snížit riziko opakované infekce.

Laboratorní diagnostika tuberkulózy

Tuberkulóza je onemocnění, které lze snadno diagnostikovat v moderních podmínkách a vědeckých úspěších. Laboratorní diagnostika tuberkulózy je ústředním bodem pro jiné diagnostické metody, za druhé pouze pro rentgenové metody výzkumu.

Klinický krevní test

U pacientů s tuberkulózou nejsou změny ve všeobecné analýze krve patognomické. Při omezené a neaktivní formě tuberkulózy je erytrocyt v normálním množství hypochromní. Když masivní infiltráty nebo kaseózní pneumonie, zatímco prevalence kaseózní lymfadenitida specifických střevních lézí, stejně jako pro velké plicní nebo pooperačního krvácení a poznámka erythropenia mikrocytózy, oligohromaziyu, polihromaziyu. Makrocytóza a zejména poikilotsitoz se setkávají mnohem méně často, obvykle s těžkou anémií. Počet retikulocytů v kroku tuberkulózy kompenzována v rozmezí od 0,1 do 0,6%, s subcompensated - od 0,6 do 1,0% a 1% je charakterizována dekompenzovaných retikulocytů.

Když tuberkulóza v některých případech může být mírný leukocytóza (až 15 tisíc leukocytů.), Méně záření, které se vyskytují v 2-7% pacientů s omezenými a snadno forem procesu se vyskytující a v 12,5% - destruktivní a progresivní plicní tuberkulózy.

Nejčastější změny se vyskytují ve vzorcích leukocytů. Označte jak relativní tak absolutní neutrofilii, mírný posun leukocytového vzorce doleva před promyelocyty. Myelocyty jsou velmi vzácné v případě nekomplikované tuberkulózy. Zvýšení počtu neutrofilů s patologickou granularitou na hemogramu pacienta s tuberkulózou vždy indikuje dobu trvání procesu: u pacientů s těžkou tuberkulózou téměř všechny neutrofily obsahují patologickou granularitu. Po ukončení vypuknutí tuberkulózy se jaderný posun poměrně rychle blíží k normálu. Patologická granularita neutrofilů obvykle trvá déle než jiné změny na hemogramu.

Obsah eosinofilů v periferní krvi se také mění v závislosti na procesu a fázi alergický stav organismu. Jejich počet se snižuje až do aneozinofiliya na těžkou a dlouhodobou ohniska nákazy a naopak se zvyšuje, jak se resorpce infiltráty a pleurální výpotek, jakož i časné formy primární tuberkulózy.

Většina forem primární tuberkulózy je doprovázena lymfopenií, která je někdy pozorována po řadu let, i po zjizvení specifických změn. Sekundární tuberkulóza ve fázi exacerbace může být v závislosti na závažnosti tohoto procesu doprovázena buď normálním počtem lymfocytů nebo lymfopenií.

To zaujímá zvláštní místo určující rychlost sedimentace erytrocytů Další testy pro vyhodnocení tuberkulózní proces (ESR), který má hodnotu v hodnocení procesu tuberkulózy toku a identifikaci jeho aktivní formy. Zvýšení ESR indikuje přítomnost patologického procesu (infekční protizánětlivé, hnisavé septický, hemoblastózy, Hodgkinova a kol.), A svědčí o jeho závažnosti, ale normální hladiny ESR ne vždy ukazují nepřítomnost patologie. Zrychlení sedimentace erytrocytů přispívá ke zvýšení krevní hladiny globulinů, fibrinogenu, cholesterol, a snižuje viskozitu krve. Zpomalení sedimentace erytrocytů je charakteristické pro stavy spojené s hemokoncentrací, zvýšením obsahu albuminů a žlučových kyselin.

Hemogram u pacientů s tuberkulózou se během léčby mění. Hematologické posuny zmizí rychleji, tím lépe terapeutický zásah. Nicméně je třeba mít na paměti vliv hepatitidy na různé antibakteriální léky. Často způsobují eozinofilii, v některých případech - leukocytózu a častěji leukopenii až po agranulocytózu a reakci lymfoidní-retikulární. Systémová hematologická kontrola a správná analýza získaných dat jsou zásadní pro posouzení klinického stavu pacienta, dynamiky procesu a účinnosti léčby.

Klinická analýza moči

U tuberkulózy močového ústrojí je analýza moči hlavní laboratořní diagnostickou metodou. Můžete pozorovat leukocyturia, erythrocyturia, proteinurie, hypoisostenurie, tuberkulózu mycobacterium, nešpecifickou bakteriurii.

Leukocyturie - nejčastějším příznakem tuberkulózy močového systému před chemoterapií a neexistuje žádná specifická pouze ve výjimečných případech, jako je například kompletní obliterace lumen močovodu. Nechyporenko test (stanovení počtu leukocytů v 1 ml moči) pomáhá objektivněji posoudit stupeň leukocyturia nefrotuberkuloze s, a v některých případech ji určit normální vyšetření moči. Musíme však mít na paměti, že leykotsitouriya může být akutní a chronická pyelonefritida, cystitida, uretritida, kameny v ledvinách a močovodů.

Erythrocyturia. stejně jako leukocyturia. jsou považovány za jeden z nejčastějších laboratorních příznaků tuberkulózy močového měchýře. Frekvence hematurie závisí na prevalenci procesu, zvyšuje se tím, jak se v ledvinách rozvíjí destruktivní tuberkulózní proces. Erythrocyturia bez leukocyturia je typičtější pro počáteční stavy tuberkulózy ledvin. Hematuria, která převládá nad leukocyturií, je důležitým argumentem ve prospěch tuberkulózy ledvin při diferenciaci s nešpecifickou pyelonefritidou.

Biochemický krevní test

Při tuberkulóze závisí změna některých biochemických parametrů především od fáze procesu, komplikací a různých souvisejících onemocnění. U pacientů s inaktivní tuberkulózou plic a jiných orgánů se celkové bílkovinné a proteinové frakce krevního séra nemění a určí jejich normální obsah.

U akutních forem onemocnění, stejně jako exacerbace a progrese chronických forem tuberkulózy klesá koeficient albumin-globulin.

Esenciální v posouzení funkčního stavu organického poškození a jater u tuberkulózy a jejích komplikací je stanovení celkového sérového a přímého bilirubinu, AST (ACT), alanin aminotransferázy (ALT). Dynamické stanovení hladiny aminotransferáz. bilirubin v léčbě pacientů s tuberkulózou, zvláště u těžkých forem - povinnou součást biochemického vyšetření pacientů s tuberkulózou a je veden na měsíční bázi.

Posouzení funkčního stavu ledvin zahrnuje stanovení sérového kreatininu a výpočet rychlosti glomerulární filtrace podle vzorce Cockcroft-Gault. Výpočet míry glomerulární filtrace pomocí Reberova vzorku poskytuje méně přesné výsledky.

Hlavním cílem dynamických biochemických studií pacientů s tuberkulózou je sledování průběhů procesu, včasná detekce nežádoucích účinků léků a adekvátní korekce vzniklých homeostatických poruch.

Aplikace biochemických metod vyšetřování extrapulmonární tuberkulózy

Nejintenzivnějším ukazatelem je obsah kyseliny tuberostearové v biologických tekutinách, ale jeho definice je spojena s technickými potížemi (potřeba plynové chromatografie a hmotnostní spektrometrie).

Prospektivní měření aktivity adenosin-deaminázy - enzymu určeného v kapalinách: synoviální, perikardiální, ascitické nebo spinální. Hlavními producenty adenosin-deaminázy jsou lymfocyty a monocyty. Stanovení adenosin deaminázy aktivity v biologických tekutinách usnadňuje diagnózu tuberkulózní synovitida, tuberkulóza lymfatických uzlin, tuberkulózní meningitidy, tuberkulózní serozity.

Některé biochemické ukazatele vzhledem k jejich nespecifickosti se určují pouze v biologických tekutinách, které se blíží cíli lézí. Změřte hladinu indikátorů jako odpověď na subkutánní nebo intradermální injekci tuberkulinu (obvykle před a 48 a 72 hodin po ní). Poté se stupeň zvýšení stupně markeru (v%) vypočítá s ohledem na počáteční úroveň.

Optimální stanovení aktivity organom specifického enzymu transamnidázy v moči, jehož vzhled se projevuje při ovlivnění ledviny různého charakteru. Studium transamidinasy je opodstatněné pouze za podmínek subkutánní injekce tuberkulinu, aby se zhoršil lokální zánětlivý proces. Stanovte aktivitu transamidinu v moči zpočátku a 24-72 hodin po zavedení 50 TE tuberkulinu. Zvětšení fermentace dvakrát a více umožňuje v 82% případů rozlišovat aktivní tuberkulózu ledvin od exacerbace chronické pyelonefritidy.

Při tuberkulóze ženských pohlavních orgánů se koncentrace haptoglobinu a malonického dialdehydu v krvi stanoví v podmínkách provokativního tuberkulinu. Subkutánně injikovaný tuberkulin v dávce 50 TE a 72 hodin později provedl druhou biochemickou studii. V případě etiologie tuberkulózy není stupeň zvýšení hladiny haptoglobinu nižší než 28% a úroveň malondialdehydu je 39% nebo více. Rovněž se používá stanovení aktivity adenosin-deaminázy v peritoneální tekutině získané z prostoru Douglase. Punkta je znovu vyšetřena 72 hodin po intradermální injekci tuberkulinu v dávkách 0,1 TE a 0,01 TE do projekce vnitřních pohlavních orgánů na přední břišní stěně. Ve prospěch tuberkulózního procesu je zvýšení aktivity adenosin-deaminázy o 10% nebo více oproti počáteční.

Když je oko postiženo, vyšetří se ohniska, která se vyskytuje v oku v reakci na antigenní stimulaci. Není žádoucí vyvinout výraznou reakci doprovázenou snížením vizuálních funkcí. Vzhledem k tomu, že hodnocení minimálních fokálních reakcí je často obtížné, pro objektivizaci závěru se doporučuje paralelní orientace a stupeň růstu haptoglobinu nebo adenosin-deaminázy v krevním séru.

Všechny biochemické studie by měly být prováděny ve spojení s jinými metodami.

Výzkum v oblasti koagulačního systému krve

Význam stavu výzkumu tohoto systému srážení krve TBC je způsobena přítomností řady pacientů s plicní tuberkulózy hemoptýzou nebo plicní krvácení, stejně jako hemokoagulačních komplikací v chirurgické léčbě tuberkulózy. Navíc latentní tok intravaskulární hemokoagulace, který přirozeně doprovází tuberkulózu, ovlivňuje průběh onemocnění a účinnost chemoterapie.

U pacientů s plicní TBC prevalence exsudativní záněty složky dochází k poklesu krevního antikoagulační aktivity. U pacientů s nízkou prevalencí konkrétní lézí v plicích s převahou produktivní hemokoagulace intravaskulární zánětlivou složkou mírně exprimován. U pacientů s plicní tuberkulózy s hemoptysis a plicního krvácení státního systému srážení krve se liší: u pacientů s nízkou ztrátou krve ve výšce gemoptoe nebo bezprostředně po jeho skončení je k prudkému nárůstu v krevní koagulační schopnosti v důsledku závažné intenzifikaci trombinoobrazovaniya při zachování zvýšené „konstrukční“ srážení krve. U pacientů s masivní ztráty krve pozorované snížení srážlivosti potenciál na úkor snížení koncentrace fibrinogenu. Aktivita faktoru XIII, počet krevních destiček. Ve fázi chirurgické léčby u pacientů s omezenými formami plicní tuberkulózy s významnými porušení dochází systém homeostáze. Pacienti s rozšířeným způsobem při výkonu pnevmon- nebo plevropnevmonektomii často vyvinout DIC, která může mít podobu „druhého nemoci.“

Pro sledování stavu srážení krve u pacientů s plicní tuberkulóza by mělo být provedeno stanovení aktivovaného parciálního tromboplastinového času (aPTT), fibrinogen, trombin, čas, index protrombinového a doby krvácení a čas srážení.

Hormonální výzkum

Nedávné experimentální a klinická pozorování ukazují na přítomnost hormonálních změn stavu v určitém tuberkulózní pneumonie. Je prokázáno, že korekce dysfunkcí hypofýzy, nadledvinek, hypofýzy, štítné žlázy systémů a pankreatické funkce ve spojení s anti-TB terapie přispívat k aktivaci fibrogeneze a opravy v určitém zánětu lokusu.

Funkční stav systému hypofýzy a štítné žlázy se hodnotí obsahem trijodthyroninu v krevním séru (T3), thyroxin (T.4), hormonu stimulujícího štítnou žlázu hypofýzy (TTG). Bylo zjištěno, že subklinická hypotyreóza je detekována v 38-45% pacientů s plicní tuberkulózy, a nejčastěji je diagnostikován s rozšířenou a fibro-kavernózní formy procesu. Ve stejných formách jsou úrovně jako T3,a T4, a existuje nerovnováha těchto hormonů ve formě zvýšení poměru T4/ Tz.

Adrenokortikální funkce je hodnocena z úrovně kortizolu v krevním séru, a endokrinní funkce pankreatu - koncentrace imuno-reaktivní inzulínu. V akutní fázi infekčního onemocnění se zvyšuje potřeba endogenního kortizolu a inzulinu. Hyperinzulinémie je také uvedeno na tělesné tkáně, rezistence na inzulín, což je typické pro každou účinnou zánětlivým procesem, zejména specifický. Stanovení glyukokortiko idnoy-adrenální funkci s aktivní plicní tuberkulózou odhaluje přítomnost Cushing u většiny pacientů. Normální hladiny kortizolu koncentrace v krvi u pacienta s infekčního zánětu, v akutní fázi je třeba považovat za relativní selhání glukokortikoidy funkce kůry nadledvinek, který může sloužit jako základ pro držení dávky adekvátní substituce glukokortikoidů.

Téměř může být stanovena jedna třetina pacientů s plicní tuberkulózou, že úroveň Ince-lin má poměrně nízká a blízko k dolní hranici normálních hodnot, zatímco 13-20% zaznamenaly významný hyperinzulinismus. Relativní hypo- a hyperinzulinismus jsou vysokými rizikovými faktory pro vývoj porušení metabolismu sacharidů v různých stupních. Tyto změny funkční aktivity B buněk pankreatu vyžadují pravidelné sledování glykémie u pacientů s tuberkulózou a včasnou prevenci diabetes mellitus. Navíc. toto slouží jako dodatečné zdůvodnění pro účelnost použití fyziologických dávek inzulinu při komplexní terapii tuberkulózy.

Obecně platí, že nižší hladiny hormonů štítné žlázy a jejich nerovnováhy hypercortisolemia a hyperinzulinismus největší dosah u pacientů s těžším průběhem tuberkulózní proces, s rozsáhlým poškozením plic a závažné příznaky tuberkulózy intoxikace.

Mikrobiologická diagnostika tuberkulózy

Mikrobiologické studie jsou potřebné k identifikaci pacientů s tuberkulózou, ověření diagnózy, monitorování a korekci chemoterapie hodnotících léčebný výsledek, jinými slovy, jelikož zápis tuberkulózy pacienta před vyjmutím z registru.

Všechny epidemiologické programy a projekty jsou založeny na hodnocení počtu bakteriálních exkretorů, které nelze provést bez použití laboratorních metod k detekci tuberkulózy mykobakterií. V průzkumu tzv. Neorganizované populace dosahuje procento bakteriálních útočníků 70 nebo více, což způsobuje, že laboratorní metody jsou dostatečně účinným prostředkem pro identifikaci pacientů s tuberkulózou v této populační skupině.

Tradiční mikrobiologické metody pro diagnostiku tuberkulózy jsou bakterioskopické a kulturní studie. Moderní metody zvažují kultivaci mycobacterium tuberculosis v automatizovaných systémech, nastavení PCR. Všechny tyto metody se však nutně spojují s klasickými bakteriologickými metodami.

Sběr diagnostického materiálu

Účinnost laboratorních studií závisí do značné míry na kvalitě diagnostického materiálu. Dodržování pravidel pro shromažďování, uchovávání a přepravu diagnostického materiálu a přesná implementace algoritmu hodnocení pacienta přímo ovlivňuje výsledek a zajišťuje biologickou bezpečnost.

Pro testování tuberkulózy se používá řada materiálů. Vzhledem k tomu, že TB logkih- nejběžnější forma tuberkulózními léze je základním materiálem pro výzkum považovat sputa a jiných druhů oddělitelnou Tracheobronchiální: sekrece horních cest dýchacích, získané po inhalaci aerosolu: bronchiální promývání; bronchoalveolární výplachy; materiál získaný bronchoskopie, a intrapulmonární transtracheální biopsie z bronchiálních aspiráty, hrtanu stěrů, exsudátů z rány a stěry al.

Účinnost výzkumu se zvyšuje, pokud se provádí kontrolovaná sběr materiálu od pacienta. Za tímto účelem je přidělen zvláštní prostor nebo jsou zakoupeny speciální kabiny. Sběr materiálu je nebezpečným postupem, proto je nutné shromažďovat materiály pro výzkum, dodržovat pravidla infekční bezpečnosti.

Materiál pro testování na mycobacterium tuberculosis se shromažďuje ve sterilních lahvích s těsně nasazenými uzávěry, aby se zabránilo kontaminaci životního prostředí a chráněný materiál před kontaminací.

Lahvičky pro sběr diagnostického materiálu musí splňovat následující požadavky:

  • musí být z materiálu odolného proti nárazu;
  • by se během autoklávování měl snadno roztavit;
  • dostatečný objem (40-50 ml):
  • mít široký otvor pro sběr sleziny (průměr nejméně 30 mm);
  • být snadno ovladatelné, průhledné nebo průsvitné, abyste mohli posoudit množství a kvalitu odebraného vzorku bez otevření víka.

K dosažení optimálních výsledků výzkumu je třeba dodržet následující podmínky:

  • Materiál shromažďujte před zahájením chemoterapie;
  • materiál pro studie musí být odebrán před ranním příjmem jídla a léků;
  • pro výzkum je žádoucí shromáždit alespoň 3 vzorky ranného hlenu. Shromážděte sputum po dobu 3 po sobě jdoucích dnů;
  • shromážděný materiál musí být co nejdříve doručen do laboratoře:
  • v případě, kdy je materiál okamžitě nedostupný do laboratoře, je uložen v chladničce při teplotě vzduchu 4 ° C po dobu nejvýše 48 hodin;
  • Při přepravě materiálu je třeba pečlivě sledovat celistvost lahviček.

Správně shromážděný sput je slizovitý nebo mukopurulentní. Optimální objem testovaného sputu je 3-5 ml.

Sputa se shromažďuje pod dohledem lékaře. Osoby odpovědné za shromažďování sputa by měly sledovat implementaci určitých pravidel:

  • je nutné pacientovi vysvětlit účel studie a potřebu vykašlat sliny nebo nazofaryngeálního hlenu, ale obsah hlubokého dýchacího traktu. Toho lze dosáhnout v důsledku produkčního kašle, ke kterému dochází po několika (2 - 3) hlubokých dechách. Je také nutné varovat pacienta, aby si měl vypláchnout ústa vařenou vodou, aby odstranil hlavní část mikroflóry rostoucí v ústní dutině a zbytky potravin, které brání vyšetření sputa;
  • lékařský pracovník, který se podílí na sběrači splachů, kromě županu a klobouku musí nosit masku, gumové rukavice a gumovou zástěru;
  • stojící za pacientem se doporučuje udržet láhev co nejblíže k jeho rtům a okamžitě oddělit do ní hlen, jak to kašle, a musí být zajištěno, že tok vzduchu je směrován od zdravotníka:
  • Po dokončení sběru sputu by lékař měl pečlivě uzavřít lahvičku s víčkem a posoudit množství a kvalitu shromážděného sputa. Pak je lahvička označena a umístěna ve speciálním pouzdru pro přepravu do laboratoře.

nebo aplikovat dráždí inhalací pomocí zařízení, instalované v místnosti sbírat - v případě, že pacient nemá před časně ráno v den odběru materiálu potřebného mu dát vykašlávání :. výtažek získávaný z kořenů marshmallow (mukaltin), bromhexinu, ambroxol, atd. produkují hlen, noc hlen. Materiál shromážděný tímto způsobem nepodléhá ochraně a měl by být zkontrolován v den sběru. Aby se zabránilo jeho "ucpání" v laboratoři ve směru, mělo by být zvláštní značka.

Pokud se v tomto zařízení neprovádějí mikrobiologické studie, shromážděný diagnostický materiál by měl být centrálně dodán do laboratoře za předpokladu, že je materiál uchováván v intervalech mezi dodávkami v chladničce nebo konzervačními prostředky. Dodávejte materiál do laboratoře v přepravních bednách, které lze snadno dezinfikovat. Každý vzorek by měl být opatřen příslušným štítkem a celá dávka by měla být vyplněna doprovodným formulářem.

Způsoby a frekvence vyšetření pacientů

Při počátečním, takzvaném diagnostickém vyšetření pacienta na tuberkulózu je nutné vyšetřit nejméně 3 části sputa po dobu 2 nebo 3 dnů. shromážděné pod dohledem zdravotnického personálu, což zvyšuje účinnost mikroskopie.

Primární screening tuberkulózy by měl provádět všechny lékařské diagnostické instituce systému zdravotní péče. V poslední době byly na základě klinických diagnostických laboratoří organizovány takzvané mikroskopické centra vybavené moderními mikroskopy a zařízeními pro epidemiologickou bezpečnost, aby se zlepšila účinnost počátečního vyšetření.

V zařízeních proti tuberkulóze se používá screeningový test, který zahrnuje vyšetření sputa nebo jiný diagnostický materiál alespoň 3-krát po dobu 3 dnů. Během léčby se mikrobiologické studie provádějí pravidelně alespoň jednou měsíčně během intenzivní fáze chemoterapie. Při přechodu na fázi léčby se studie provádějí méně často - s intervalem 2-3 měsíců, zatímco frekvence studie je snížena na dvě.

Vlastnosti sbírky diagnostického materiálu pro extrapulmonární tuberkulózu

Feature patologický materiál s mimoplicní formy tuberkulózy - Mycobacterium tuberculosis nízké koncentraci v něm, což vyžaduje více citlivé způsoby mikrobiologických studií, a to především na secí techniky médiu.

U tuberkulózy močového měchýře je nejvhodnějším studijním materiálem moč. Sběr moči by měl provádět speciálně vyškolená zdravotní sestra.

Vnější genitálie se promyjí vodou mýdlem nebo slabým roztokem manganistanu draselného. Vnější otevírání močové trubice je pečlivě ošetřeno. Ve sterilní lahvičce se shromažďuje průměrná část ranního moči: u mužů, přirozeně u žen, s použitím katetru. Moč z ledvinné pánve se shromažďuje ve sterilních zkumavkách s katetrizací jedné nebo dvou ledvin, ve druhém případě - nutně odděleně od každé ledviny. Malé množství této moči se centrifuguje, sediment se zkoumá.

U mužů, spermií, bodkovaných varlat je tajemství prostaty podrobeno odstředění, aby se získala sraženina. Při lokalizaci specifického procesu v genitální oblasti u mužů může masáž prostaty podpořit sekreci sekrecí obsahujících mycobacterium tuberculosis.

Menstruační krev u žen se odebírá nasáním nebo použitím Kafka čepice. Získaný materiál se zbaví červených krvinek, promyje se destilovanou vodou a potom se centrifuguje. Sraženina se zkoumá.

Přidělení z cervikálního kanálu dělohy se shromažďuje v některých kapacitách Kafky nebo ve víčku, to znamená, že je žádoucí akumulovat 1-2 ml patologického materiálu.

Materiál získaný z operativních zákroků na ledvinách, pohlavních orgánech. s biopsií, vyškrabáním z endometria, homogenizovat. K tomu je umístěna ve sterilní maltě a důkladně rozdrcena sterilními nůžkami. K této suspenzi byl přidán sterilní říčního písku v množství, které odpovídá jeho hmotnosti, a pak doplnit s 0,5-1.0 ml izotonického roztoku chloridu sodného a vše se rozetře až pastovité hmoty s přídavkem isotonického roztoku chloridu sodného (4-5 ml). Pak se hmota nechá usadit po dobu 1 až 1,5 minuty, supernatant se zkoumá.

Tuberkulóza kostí a kloubů. Puncka (hnis z abscesů) získaná sterilní injekční stříkačkou je umístěna ve sterilních pokojích a okamžitě dodána do laboratoře. Sterilní pipeta, předtím zvlhčená sterilním izotonickým roztokem chloridu sodného, ​​vezměte 2-5 ml hnisu, přeneste ji do lahvičky s perličkami a přidejte další 2-3 ml izotonického roztoku chloridu sodného. Láhev je uzavřena korku a protřepávána v žaludku po dobu 8-10 minut. Homogenizovaná suspenze se zkoumá.

U fistulózních forem osteoartikulární tuberkulózy se užívá hnis z píštěle. Zbylý výboj se shromažďuje přímo do zkumavky. V případech, štíhlé Pyorrhea píštěle promyje sterilním izotonickým roztokem chloridu sodného, ​​a po promytí byly shromážděny do zkumavky, nebo kus tamponu impregnovaného hnisem zaslané pro analýzu.

Chirurgický materiál, získaný v průběhu chirurgického zákroku na kosti a klouby se mohou skládat z hnisavé-nekrotických hmot, granulací, jizvy, kostní tkáně synoviálních membránách a jiných substrátů. Jeho léčba je prováděna, stejně jako u tuberkulózy ledvin.

Mikrobiologická studie synoviální tekutiny ve 3% roztoku citronanu sodného (poměr 1: 1) k prevenci koagulace se provádí okamžitě po punkci.

Tuberkulóza lymfatických uzlin. Také se zkoumá hnis, extrahovaný při punkci lymfatických uzlin. jako hnis z abscesů. Tkáně lymfatických uzlin získané během chirurgických zákroků, biopsie, jsou vyšetřovány stejně jako u jiných forem tuberkulózy.

Studium stolních hmot na mycobacterium tuberculosis je extrémně vzácné kvůli téměř úplnému nedostatku pozitivních výsledků.

Mikroskopie mykobakterií

Mikroskopie sputa je poměrně rychlá, jednoduchá a levná metoda, která by měla být použita ve všech případech s podezřením na tuberkulózu. Kromě toho se tato studie provádí s cílem zhodnotit účinnost chemoterapie a zkontrolovat obnovení nebo selhání léčby, pokud neexistuje žádný test kultury.

Používají se dvě metody mikroskopického vyšetření:

  • metoda přímého mikroskopu, pokud se připraví přímo z diagnostického materiálu;
  • metoda mikroskopie sedimentu připraveného z dekontaminace ošetřeného materiálu pro kultivaci.

První metoda se používá v těch laboratořích, kde se provádějí pouze mikroskopické studie (klinické a diagnostické laboratoře obecné lékařské sítě).

Nejlepší výsledky mikroskopického vyšetření se získají koncentrací diagnostického materiálu (například centrifugací).

K detekci Mycobacterium tuberculosis s pravděpodobností 50% při provádění mikroskopie by měl 1 ml sputa obsahovat více než 5000 mikrobiálních buněk. Sputa pacientů s pulmonálními formami tuberkulózy obvykle obsahuje významné množství kyselých bakterií, které jim umožní spolehlivě detekovat bakterioskopií. Diagnostická citlivost této metody může být zlepšena vyšetřením několika vzorků sputa od jednoho pacienta. Negativní výsledek bakterioskopického vyšetření nevylučuje diagnózu tuberkulózy, jelikož sputa některých pacientů obsahuje méně mykobakterií, než je možné detekovat pomocí mikroskopie. Špatná příprava skvrny sputa může také způsobit negativní výsledek bakterioskopického vyšetření.

Nejběžnější metodou pro detekci kyselých-rychlých mykobakterií v nátěru je barva podle Tsiol-Nelsena. Metoda je založena na pronikání karbolové fuchsinem v mikrobiální buněčné membráně obsahující voskovitou lipidovou vrstvu se současným vystavením teplu a silný účinek leptadla fenolu. Následné zbarvení nátěru s 25% roztokem kyseliny sírové nebo 3% kyseliny chlorovodíkové vede k zbarvení všech nekyselinových struktur. Zbarvené prvky nátěru jsou obarveny 0,3% roztokem methylenové modři. Mykobakterie neberou obyčejné anilinové barvy, což má za následek acidorezistentní bacily jsou zbarveny karmínově červenou barvu, a jiné choroboplodné zárodky a buněčné elementy - modře.

Pro nátěrech obarvených Ziehl-Nelsenu pomocí světelného binokulárního mikroskopu s olejovým objektivem (90- nebo 100-násobné zvýšení) a okulárem na zvětšení 7- nebo 10-násobné. Prozkoumejte 100 zorných polí, které stačí k identifikaci jednotlivých mykobakterií v nátěru. V případě, že výsledek takové studie je negativní, pro potvrzení se doporučuje zobrazit dalších 200 zorných polí. Zaznamenejte výsledky s uvedením počtu zjištěných kyslíkových bacilů (KUM).

Kromě této techniky se pro luminiscenční mikroskopii používají barevné fluorochromy, které umožňují dosažení nejlepších výsledků. Použití této metody zvyšuje účinnost mikroskopie o 10-15%. Při léčbě mykobakterií s luminiscenčními barvivy (auraminem, rodamínem atd.) Se tyto látky také váží na voskovité struktury mikrobiální buňky. Při ozařování barevných buněk s vzrušujícím světelným zdrojem (určité spektrum ultrafialového záření) začnou svítit oranžové nebo jasně červené světlo na černém nebo tmavě zeleném pozadí. Vzhledem k vysokému jasu a kontrastu viditelného obrazu může být celkové zvětšení mikroskopu sníženo o 4 až 10krát, zvětšení zorného pole a doba pozorování přípravku klesá. Spolu s tím, díky mnohem větší hloubce ostrosti, můžete zvýšit pohodlí studia.

Když je fluorescenční mikroskopie použita pro skenování stejné oblasti, roztírání vynakládá podstatně méně času než světelná mikroskopie barvení Tsiol-Nelsen. Pokud za jeden pracovní den mikroskop zkoumá asi 20-25 takovýchto skvrn, pak pomocí fluorescenční mikroskopie může zkoumat více než 60-80 vzorků najednou. Zkušení mikroskopisté vědí, že zbarvení buněk se směsí auraminu a rodaminu je určitým způsobem specifickým pro kyselinově rychlé bacily, které v tomto případě vypadají jako zlaté tyčinky. Saprofyty jsou malované nazelenalou barvou.

Další důležitou výhodou způsobu fluorescenční mikroskopie - schopnost detekovat změněné Mycobacterium, ztratil pod vlivem nepříznivých faktorů, včetně intenzivní chemoterapie, kislotousotoychivosti majetku a v souvislosti s tímto barvením Ziehl-Nelsenu není detekován.

Nevýhodou metody fluorescenční mikroskopie je poměrně vysoká cena mikroskopu a jeho provoz. Nicméně v centralizovaných nebo jiných velkých laboratořích, kde zátěž překračuje normu tří laboratorních techniků pracujících se třemi konvenčními mikroskopymi, je levnější používat namísto toho jeden fluorescenční mikroskop.

Bakterioskopické metody mají spíše vysokou specificitu (89-100%). Asi 97% pozitivních výsledků získaných jakoukoli metodou mikroskopie jednoznačně potvrzují výsledky výsevu.

Je třeba poznamenat, že v mikroskopickém zkoumání nátěrech patologického materiálu nemůže identifikovat druhy acidorezistentní bacily detekován. Způsob mikroskopie umožňuje, aby se vyjádřil pouze na přítomnosti nebo nepřítomnosti kyseliny v přípravě mikroorganizmů, což lze vysvětlit existencí v přírodě z velkého počtu morfologicky podobné tuberkulózou mykobakterií komplexní mikroorganismů rezistentních kyselin nontubercular.

Výsledky mikroskopie jsou vyhodnocovány v semikvantitativních jednotkách.

Aby bylo možné porovnávat výsledky různých metod mikroskopie, jsou zavedeny empirické koeficienty. Například, porovnat výsledky nátěrech obarvených s fluorescenčními barvivy, data výzkum světelný mikroskop (1000 násobné zvětšení), je nutné rozdělit počet acidorezistentní bacily detekována fluorescenčním mikroskopem, odpovídající koeficient při 250-násobném zvětšení, - až 10, 450krát - na 4, 630krát - na 2.

Vlastnosti mikroskopie pro extrapulmonární tuberkulózu

Vykonává se přímá mikroskopie, stejně jako mikroskopie nátěrů připravených po obohacení, následovaná barvením Tsiol-Nelsen nebo luminiscenčními barvivy. Přímá mikroskopie nátěrů je neúčinná kvůli nízké koncentraci mykobakterií v materiálu, a proto je racionálnější používat metody obohacování. Nejúčinnější je odstřeďování. V případě, že biologický materiál je viskózní, centrifugace se nanáší současným zkapalňování a homogenizace materiálu, který se provádí za použití vysokorychlostních odstředivek s odstředivou silou 3000 g a roztoky chlornanu. Jiné způsoby obohacování, jako je například mikro flotace, se v současné době nepoužívají kvůli vzniku biologicky nebezpečných aerosolů.

Kulturní metoda diagnostiky tuberkulózy

Způsob výsevu nebo metoda kultivace je citlivější než mikroskopie na rozmazání a má řadu výhod oproti této mikroskopii. Umožňuje detekovat několik desítky životaschopných mykobakterií v testovacím materiálu a má velkou diagnostickou hodnotu. To je zvláště důležité při vyšetření materiálu od nově diagnostikovaných nebo léčených pacientů, kteří uvolňují malé množství mykobakterií.

Ve srovnání s mikroskopem, kultura může zvýšit počet odhalených případů tuberkulózy o více než 15-25%, stejně jako ověření tuberkulózy v časnějších fázích, kdy se nemoc je stále dobře reaguje na léčbu. Velmi důležitou výhodou kultivačního testu je možnost získat kulturu buňky, která může být identifikována a studována s ohledem na citlivost vůči lékům, virulenci a jiné biologické vlastnosti.

Nevýhody způsobů kultivace zahrnují jejich trvání (čekací doba materiálů dosahuje 10 týdnů). vyšší náklady, složitost zpracování diagnostického materiálu.

Principy předběžné léčby diagnostického materiálu

Konvenční mikrobiologické metody nelze použít při provádění studií o tuberkulóze. To je dáno skutečností. že mycobacterium tuberculosis roste velmi pomalu a většina klinických vzorků obsahuje rychle rostoucí pyogenní a hnilobné mikroorganismy, houby. Jejich rychlý růst na bohatých živných médiích interferuje s vývojem mykobakterií a neumožňuje izolaci vyvolávajícího tuberkulózy, takže diagnostický materiál musí být před ošetřením předem ošetřen. Kromě toho jsou mykobakterie uvolněné z dýchacích cest pacienta obvykle obklopeny velkým množstvím hlenu, což ztěžuje jejich koncentraci. V tomto ohledu je nutné před vypálením sputu a dalších podobných materiálů, jejich zkapalnění, dekontaminace.

Všechny detergenty a dekontaminy mají více či méně výrazný toxický účinek na mykobakterie. V důsledku zpracování může zemřít až 90% mykobakterií. Pro udržení dostatečného množství mykobakteriální populace, šetřící potřebu použití technik zpracování, které umožňují, na jedné straně, k potlačení rychle rostoucí pyogenní bakterie a zkažený, a na druhé straně - aby se zachovala životaschopnost mykobakterií přítomných v materiálu.

V závislosti na materiálu, jeho stupeň homogenity a znečištění pro předzpracování pomocí různých dekontaminační: sputum - 4% roztoku hydroxidu sodného, ​​roztoky trohzameschonnogo fosforečnan sodný 10%, benzalkoniumchlorid, fosforečnan sodný, NALC-NaOH (N-acetyl-L-cysteinu hydroxidu sodného) v konečné koncentraci 1% roztoku hydroxidu sodného, ​​v moči a jiných kapalných látek - roztoku kyseliny sírové 3%, pro kontaminované vzorky, materiály obsahující tuk - roztok kyseliny oxalové, přičemž se 5%. Kromě toho se v některých případech používají enzymy, povrchově aktivní látky (detergenty). Aplikační Tween detergenty a jiné mykobakteriální smrt provází méně buňkách (40-50% přežít). Mohou však být použity pouze pro tekuté materiály. Největší distribucí na světě byla NALC-NaOH. vyrobené v souborech. Tato metoda umožňuje přidělit více než 85% populace mykobakteriálních buněk. Dekontaminační tkanesoderzhaschih pevné látky těžší odhadnout, protože stupeň disperze materiálu během homogenizace obtížné. Například biopsie léčba lymfatických uzlin je často doprovázena zvýšenou frekvencí kontaminace cizími flóry. V tomto případě lze použít 1% etonia.

Nehomogenní materiál se homogenizuje skleněnými kuličkami za přítomnosti dekontaminantů. Kapalné materiály se před centrifugují a zpracuje se pouze sraženina.

Secí a inkubační techniky

Po předúpravě se materiál centrifuguje, čímž se vysráží mykobakterie a zvyšuje se jejich obsah v sedimentu ("obohacování kalu"). Výsledná sraženina se neutralizuje a inokuluje (naočkuje) hustým živným médiem nebo zkumavkami s kapalnými (polokapalnými) médii. Ze zbytku sedimentu jsou připraveny nátěry pro mikroskopické vyšetření. Technika očkování by měla zabránit křížové kontaminaci diagnostického materiálu.

Pro spolehlivou klinickou interpretaci výsledků mikrobiologické studie je třeba dodržet následující pravidlo: mikroskopické studie a studie o kultuře musí být provedeny paralelně ze stejného vzorku diagnostického materiálu.

Inokulované trubice jsou umístěny v termostatu při teplotě 37 ° C po dobu 2 dnů ve vodorovné poloze. To zajišťuje rovnoměrnější absorpci materiálu do kultivačního média. Po 2 dnech se trubice přemístí do svislé polohy a hermeticky utěsní gumovou nebo silikonovou zátkou, aby se zabránilo usušení zasetého média.

Plodiny se uchovávají v termostatu při 37 ° C po dobu 10-12 týdnů s pravidelným týdenním prohlížením. Pro každý náhled jsou zaznamenány následující parametry:

  • doba vizuálně pozorovaná ode dne výsevu;
  • míra růstu (počet CFU);
  • kontaminace plodiny cizí mikrobiální flórou nebo houbami (tyto trubice jsou odstraněny);
  • nedostatek viditelného růstu. Trubky jsou ponechány v termostatu až do dalšího prohlížení.

Nutriční média

Pro kultivaci mykobakterií se používají různá živná média; hustá, polotekutá, kapalná. Avšak žádné ze známých živných médií nemá vlastnosti, které zajišťují růst všech mykobakteriálních buněk. V souvislosti s tím se doporučuje používat 2-3 živné látky různého složení, aby se zvýšila jejich účinnost.

WHO doporučuje prostředí Levenstein-Jensen jako standardní médium pro primární izolaci příčinného činitele tuberkulózy a pro stanovení jeho citlivosti na léky. Jedná se o prostředí s hustým vajíčkem, na němž je růst mykobakterií dosažen v 20. až 25. dni po naočkování bakterioskopicky pozitivního materiálu. Plodiny bakterioskopicky negativního materiálu vyžadují delší inkubační dobu (až 10-12 týdnů).

V naší zemi navrhovaná E.R. Finské vaječné prostředí Finn-II. To se liší tím, že místo L-asparaginu používá glutamát sodný, který spouští jiné způsoby syntézy aminokyselin mykobakterií. Růst se na tomto médiu objevuje poněkud dříve a frekvence přidělení mykobakterií je 6-8% vyšší než v médiu Lowenstein-Jensen.

Pro zlepšení účinnosti bakteriologické diagnostiky mimoplicní tuberkulózy je vhodné zařadit do složitých živném médiu modifikovaném médiu Finn-II. K urychlení růstu v živném prostředí, Finn-II je dále podáván sodík thioglykolát 0,05%, snížení koncentrace kyslíku. Pro ochranu enzymu z Mycobacterium systémů toxických produktů peroxidace lipidů v živném médiu Finn-II podávat antioxidační α-tokoferol acetátu v koncentraci 0,001 ug / ml. Očkování diagnostického materiálu se provádí standardním postupem.

V ruských laboratořích proti tuberkulóze se používají další modifikace hustých nutričních médií; navrhl G.G. Mordovské živné médium "New" vyvinuté firmou V.A. Anicická živná média A-6 a A-9 atd.

Vzhledem k tomu, že v procesu chemoterapie je poškození na různé metabolické systémy mikrobiálních buněk, některé mykobakteriální populace ztrácí schopnost vyvinout normálně v běžném živném médiu a vyžaduje osmoticky vyvážené (nebo polotekuté) kultivačního média.

Hodnocení a zaznamenávání výsledků očkování diagnostického materiálu

Některé kmeny a druhy mykobakterií rostou pomalu, růst se může objevit až do 90. dne. Počet těchto plodin je malý, což však umožňuje odolat plodinám v termostatu po dobu 2,5-3 měsíců.

Virulentní kultury mycobacterium tuberculosis obvykle rostou v prostředí s hustým vajíčkem ve formě R-kolonií různých velikostí a druhů. Kolonie jsou suché, vrásčité, slonovinové, mírně pigmentované. V jiných médiích může být kolonie mycobacterium tuberculosis vlhčí. Po ukončení chemoterapie nebo během léčby mohou být přiděleny hladké kolonie s vlhkým růstem (S-formy).

Při izolaci plodin je použita sada speciálních studií k odlišení mycobacterium tuberculosis od netuberkulózních mykobakterií a kyselých rezistentních saprofytů.

Pozitivní reakce je dána po povinné mikroskopické vyšetření barveny Ziehl-Nelsenu stěru kolonií. V případě růstu mykobakterií v nátěru detekovat jasně červené tyčinky ležící jednotlivě nebo ve skupinách, tvořit shluky ve formě plsti nebo opletení. U mladých kulturách, zejména izolovaných z dlouhodobé léčby pacientů s chemoterapií, mykobakterie liší exprimovaný polymorfismus, až přítomnosti tyče ve tvaru, spolu s krátkými, téměř kokovitý nebo prodloužených verzí, které se podobají mycelium.

Rychlost růstu mykobakterií je indikována následujícím schématem: (+) - 1-20 cfu in vitro (málo vylučované bakterie); (++) - 20-100 CFU in vitro (mírné vylučování bakterií); (+++) -> 100 CFU in vitro (bohaté vylučování bakterií). V laboratorní diagnostice tuberkulózy nestačí odpovědět na to, zda je mykobakterium detekováno jednou nebo jinou metodou. mít podrobné pochopení rozsahu a povahy mykobakteriální populace, jejího složení a vlastností. Právě tyto údaje nám umožňují správně interpretovat stav procesu, naplánovat taktiku a včas upravit léčbu.

V posledních letech bylo navrženo urychlit růst mykobakterií, navrhnout živné prostředí na bázi agaru s různými přísadami růstu a použití speciální směsi plynů. K dosažení růstu mykobakterií na těchto médiích během kultivace vzniká atmosféra s vysokým obsahem oxidu uhličitého (4-7%). K tomu účelu je třeba speciální CO2-inkubátory. Nejrozvinutější automatizované systémy pro kultivaci mykobakterií: MGIT-BACTEC-960 a MB / Bact.

Jeden takový systém - MGIT systém (růst mykobakterií označující trubka), který se odkazuje na vývoj špičkových technologií a je určen pro rychlou bakteriologickou diagnostiku tuberkulózy a Mycobacterium náchylnosti k první linie léků, a některé léky druhé řady. MGIT je zaměřen na jeho použití jako součást zařízení VASTES-960. Mikroorganismy se kultivují ve speciálních zkumavkách s kapalným živným médiem založeným na modifikovaném médiu Middlebrook-7H9. Pro stimulaci růstu mykobakterií a potlačování růstu doplňky cizí mikroflóry používaný růstu MGIT Growth Supplement a směs antimikrobiálních látek panta.

Růst mikroorganismů se zaznamenává opticky. Je založen na fluorescenci, k níž dochází při spotřebování kyslíku mykobakteriemi během růstu. Fluorescenční barvivo závislé na kyslíku se nachází na spodní straně speciální zkumavky a je pokryto vrstvou silikonu. Reprodukce mykobakterie vede ke snížení množství kyslíku v trubici a snížení koncentrace, která způsobuje zvýšení fluorescence, která se stává viditelný za ozařování ultrafialovým světlem trubky a automaticky registrován fotosenzor vestavný spotřebič VASTES-960. Intenzita luminiscence se zaznamenává v jednotkách růstu (jednotky růstu GU). Údaje o růstu jsou zaznamenávány v počítači, kde mohou být automaticky uloženy. Počítačová analýza růstových křivek může poskytnout informace o přítomnosti různých Mycobacterium bazénů, včetně nontubercular, a také pomáhá vyhodnotit vlastnosti růstu mykobakterií.

V důsledku doby výskytu takových systémů mykobakteriální růst se výrazně snižuje, v průměru 11 dní VASTES-960 a 19 dny na MB / Bact na 33 dnů na standardním pevném živném médiu. Je třeba poznamenat, že tyto systémy vyžadují vysoce kvalifikovaný personál. Očkovací materiál pro kapalná média bude vyveden setím na Lowenstein-Jensen média, hrají roli záskok v případech, kdy jiné nosiče Mycobacterium tuberculosis nedovolují růst.

Stanovení citlivosti mykobakterií na léky

Stanovení spektra a stupně citlivosti mykobakterií na léky proti tuberkulóze má velký klinický význam, stejně jako epidemiologické hodnocení šíření tuberkulózy s rezistencí na léky. Navíc monitorování rezistence na léčiva umožňuje posoudit účinnost programu tuberkulózy jako celku, což je integrálním ukazatelem výkonnosti všech složek činností proti tuberkulóze.

Mnohočetnost a načasování citlivosti na léky:

  • před zahájením léčby jednou pro stanovení strategie a taktiky léčby:
  • pokud jsou izolovány z nemocných kultur z různých materiálů (sputa, tekutina BAL, moč, výpotky, tekutina apod.), jsou zkoumány všechny izolované kmeny:
  • na konci intenzivní fáze léčby bez klinické a radiologické dynamiky:
  • pokud je nutné změnit režim léčby v následujících případech:
    • absence skvrny sputu;
    • re-izolace kultury po negativním rozpadu sputa;
    • drastický nárůst počtu CMB v tamponu po počátečním poklesu. Je dobře známo, že kmeny mycobacterium tuberculosis, které jsou heterogenní z hlediska citlivosti na léky, jsou izolovány od materiálu od pacienta s tuberkulózou. Citlivost kmenů na léky proti tuberkulóze se může lišit v rozmezí léků, stupně, frekvence a rychlosti výskytu rezistence.

Stupeň lékové rezistence Mycobacterium tuberculosis byla stanovena v souladu se stanovenými kritérii, které jsou zaměřeny na klinický význam a stabilita závisí na aktivitě anti-TB léku, jeho farmakokinetiku, koncentrace v lézi. maximální terapeutická dávka a tak dále.

Stanovení citlivosti mykobakterií na léky se v současné době provádí mikrobiologickými metodami:

  • Absolutní koncentrace (metoda ředění na hustém nebo kapalném živném médiu),
  • rozměry,
  • koeficient odporu.

Obvykle stabilita projevuje vizuálně pozorovatelný růst kolonií Mycobacterium tuberculosis, ale existují techniky, které indukují časná stadia růstu v dělících se buňkách Mycobacterium ve formě barevné reakce. Tyto metody zkracují zkušební čas z 3-4 na 2 týdny.

Jak je sjednocena v Rusku byla prodloužena, doporučuje chemoterapie metodou WHO výboru absolutních koncentrací, což je z metodického hlediska, je nejjednodušší, ale vyžaduje vysokou přesnost a standardizace laboratorních postupů. Test citlivosti na léky se skládá ze souboru testovacích zkumavek se živným médiem modifikovaným anti-TB léky. Souprava se skládá z 2-3 trubek s různými koncentracemi každého z léčiv používá, jedna řídicí trubky bez léku na životní prostředí a jedna zkumavka obsahující 1000 mcg / ml sodného Sali tsilovokislogo nebo 500 ug / ml paranitrobenzoynoy kyselina nontubercular pro detekci růstu mykobakterií.

Pro přípravu sady médií s přípravky se použije modifikované médium Levenstein-Jensen (bez škrobu), které se nalije do baňek. V každé baňce se přidá specifický objem vhodného ředění antituberkulózního přípravku. Obsah baňky se důkladně promíchá, nalije do zkumavek a skládá se ve skloněné poloze po dobu 40 minut při teplotě 85 ° C. Doporučuje se, aby se médium stočilo v elektrickém převíječi s automatickým řízením teploty. Ve středu s léky proti TBC

1. řada může být uchovávána v chladničce při 2-4 ° C po dobu 1 měsíce, s přípravky druhé řady - ne více než 2 týdny. Skladování médií s přípravky při pokojové teplotě je nepřijatelné. Při přípravě roztoků léků proti tuberkulóze se brát v úvahu jejich aktivita, výpočet koncentrace upravené o molekulovou hmotnost nespecifické části přípravku, čistotu atd. K určení citlivosti na léky se používají pouze chemicky čisté látky.

Principem metody je stanovení koncentrace antituberkulózního léčiva, které inhibuje růst významné části mykobakteriální populace. Pokud je provedena správně, má tato metoda dobrou spolehlivost.

Před testem je nutné zajistit, aby izolovaná kultura mycobacterium tuberculosis neměla cizí mikroflóru. Z kultury mykobakterií v 0,9% roztoku chloridu sodného připravena homogenní suspenze obsahující 500 milionů mikrobiální těles v 1 ml (optický zákal standardní 5 jednotek). Výsledná suspenze se zředí 0,9% roztokem chloridu sodného (1:10) a 0,2 ml kaše se přidá do každé zkumavky sady kultivačních médií. Očkované Zkumavky byly umístěny do inkubátoru při teplotě 37 ° C a udržuje se ve vodorovné poloze po dobu 2-3 dnů na šikmé ploše média byla rovnoměrně inokulují suspenzí Mycobacterium tuberculosis. Trubky jsou pak přeneseny do svislé polohy a inkubovány po dobu 3-4 týdnů. Výsledky jsou zaznamenány po 3-4 týdnech.

Vzhledem k tomu, načasování uvolňování látky z klinického materiálu na živném médiu tvoří nejméně 1-1,5 měsíce lékové citlivosti mohou být získány tímto způsobem, je ne dříve než po 2-2,5 měsíce po očkovacího materiálu. To je jeden z hlavních nedostatků metody.

Interpretujte výsledky stanovení citlivosti mykobakterií na léky na základě určitých kritérií. Na pevném kultivačním médiu se za citlivé na koncentraci léku, který je obsažen v médiu, v případě, že počet kolonií mykobakterií pěstovaných in vitro s tímto léčivem nečiní více než 20 s bohatým růstem v kontrolní zkumavky bez léčiva. Pouze v přítomnosti více než 20 kolonií je kultura považována za odolnou vůči této koncentraci. V praxi při získávání výsledků růstu ve zkumavkách blížících se 20 cfu. je nutné upozornit klinickou jednotku, že citlivost nebo odpor je v tomto případě hraniční, neboť někdy může vysvětlit fuzzy dynamiku klinických indikátorů.

U různých léků je stanovena určitá koncentrace, při které je pozorována reprodukce kritického podílu mykobakteriální populace. Tyto koncentrace se nazývají "kritické". Jako kritérium stability se používá růst populace mykobakterií na živném médiu s přípravkem v kritické koncentraci.

V domácí praxi TB se při stanovení rezistence vůči léku neomezují pouze na stanovení kritických koncentrací. To je dáno skutečností. že rozšířená úroveň definice lékové rezistence umožňuje lékař přesněji polohy taktiku chemoterapie s použitím znalosti potenciace účinku lékových kombinací, křížem krážem očekávaný odpor nebo použít účinnější léky skupina použita anti-TB léčivy.

Metoda absolutní koncentrace je nejjednodušší, ale je také nejcitlivější na chyby, které se při provádění provedou. Spolehlivější, zvláště při určování citlivosti na druhé linie léčiv a obvyklé mimo Rusko, je metoda proporcí. Bere v úvahu nedostatky metody absolutních koncentrací, ale při provádění je pracnější.

Metoda je velmi podobná metodě absolutní koncentrace. Příprava testovacích zkumavek s léky se provádí stejným způsobem. jako v absolutní koncentrační metodě. Dávka semena suspenze mykobakterie tuberculosis je však snížena o faktor 10. což eliminuje frekvenci spontánní rezistence některých kmenů mykobakterie tuberculosis na takové léky, jako je Etambutol, protionamid, kapreomycin. Jako kontrola se použijí 2 nebo 3 zkumavky se stejnou dávkou osiva ve zkumavkách, postupně zředěné 10 a 100 krát. Kritériem stability je podíl vizuálně pozorovaného růstu mykobakterie tuberculosis. U léků 1. série je kritériem stability přebytek růstu 1% počáteční populace, u léčivých přípravků druhé řady - zvýšení o 1 nebo více než 10% počátečního, v závislosti na zvolené kritické koncentraci.

V roce 1997 pracovní skupina Světové zdravotnické organizace a Mezinárodní unie pro identifikaci dobré tuberkulózy odporu TB drogy učinil úpravy těchto kritérií, které nabízejí za rezistentní mykobakterie, které nerostou na pevný vaječný média Lowenstein-Jensen v následujících koncentracích:

  • dihydrostreptomycin - 4 μg / ml;
  • isoniazid 0,2 μg / ml:
  • rifampicin 40 μg / ml:
  • Etambutol je 2 μg / ml.

V roce 2001 byly navrženy kritické koncentrace pro následující léky druhé řady (pro kritický podíl 1%):

  • capreomycin - 40 mcg / ml;
  • protionamid - 40 mcg / ml;
  • kanamycin - 30 μg / ml;
  • viomycin - 30 mcg / ml;
  • cykloserin 40 μg / ml;
  • kyselina aminosalicylová - 0,5 μg / ml;
  • ofloxacin - 2 μg / ml.

Výsledky růstu jsou vyhodnoceny po 4 týdnech předběžné a po 6 týdnech kultivace - jako poslední.

Pro stanovení citlivosti na léčiva k pyrazinamidu, který je široce používán v moderních chemoterapii tuberkulózy, doporučené kritické koncentraci 200 ug / ml. Nicméně, stále ještě neexistuje všeobecně přijímaný způsob pro stanovení odolnosti proti této drogy na pevných živných médií, protože jeho antibakteriální účinnosti se projevuje pouze v kyselém prostředí (pH ° C;

  • absence pigmentace (slonoviny);
  • výrazně kyselé barvy;
  • pozitivní niacinový test;
  • pozitivní test nitrátové reduktázy;
  • nepřítomnost termostabilní katalázy (68 ° C).
  • Absence růstu na médiu Levenstein-Jensen obsahující:
    • 1000 μg / ml salicylátu sodného,
    • 500 μg / ml kyseliny paranitrobenzoové,
    • 5% chloridu sodného:
  • růst v přítomnosti 1-5 ug / ml thiofen-2-karboxylové kyseliny.
  • Význam diferenciace izolovaných mykobakterií se výrazně zvýší zvýšením frekvence zaznamenávání případů HIV / AIDS souvisejících s tuberkulózou nebo mykobakteriózou. V současné době neexistuje absolutní jistota připravenosti praktických regionálních laboratoří správně provádět tento objem práce.

    Imunologická diagnostika tuberkulózy

    Existuje celá řada univerzálních jevů, drog a imunologické testy, které byly původně objeveny v tuberkulózy nebo modelů imunitní odpovědi na mykobakterií. Patří mezi BCG tuberkulinu, takový jev jako kožní DTH (tuberkulinu - Pirquet a Mantoux reakce), v reakci na podkožní tuberkulinových senzibilizovaných zvířat (Koch jev). Jedna z prvních protilátek u infekčních onemocnění byla také zjištěna při tuberkulóze. Samozřejmě, že hlubší porozumění dobré mechanismy tuberkulózy imunitních a jejich genetické kontroly, tím větší může být použití imunologických metod a léků, které mají vliv na imunitní systém, řešit praktické problémy TB.

    Nejdůležitějším a nejsložitějším praktickým problémem je v současnosti zjišťování tuberkulózy v procesu hromadného screeningu obyvatelstva. Nicméně, navzdory četným hlášením o "úspěších" (na omezeném materiálu) neexistuje žádná vhodná imunologická metoda (reprodukovatelná v "žádné zbrani") a lék vhodný pro tento účel.

    Imunologické metody, zejména sérologické studie (stanovení antigenů, protilátek) a testy provokující tuberkuliny, jsou v klinické praxi velmi rozšířené.

    V první řadě mezi imunologickými studiemi používanými v diferenciální diagnostice jsou serologické metody - stanovení antigenů a protilátek v různých prostředích těla.

    Specificita protilátek proti tuberkulóze mykobakterií závisí na antigenu použitém v imunotestu. Je navrženo významné množství antigenů, z nichž první je tuberkulin PPD:

    • PAP a dalších komplexních přípravků z kultivační kapaliny;
    • ultrazvuková dezintegrace;
    • Extrakt z tritonu a další komplexní přípravky buněčných stěn;
    • 5-antigen (Daniel);
    • 60-antigen (Coccito);
    • Lipoarabinomanan;
    • šňůrový faktor (trehalóza-6,6-di-mykolát);
    • fenolické a jiné glykolipidy;
    • lipopolysacharidy;
    • antigen vázající fibronektin;
    • proteiny (nejčastěji rekombinantní); 81,65,38,34,30,19,18,16,15,12 CDA atd.

    V důsledku let výzkumu ruských a zahraničních vědců odhalily základní zákony a účinnost protilátky sérologickou diagnózu tuberkulózy: složitější antigenu je vyšší citlivost a nižší specificitu testu. Specifičnost v různých zemích, se liší v závislosti na počtu obyvatel infekce M. tuberculosis a nontubercular mykobakterií z nesoucí BCG vakcinaci a další. U dětí, informační obsah serodiagnosis je nižší než u dospělých. U primární tuberkulózy (častěji u dětí) je definice IgM mnohem informativní. se sekundární IgG. U pacientů infikovaných HIV se snižuje informativní hodnota sérologické diagnózy při stanovení protilátek. Stanovení účinnosti protilátek je závislá na počtu „klinických aspektů“: Proces aktivita (přítomnost nebo nepřítomnost „izolace“ mykobakterií přítomnost rozpadu dutin, je stupeň infiltrace), prevalence procesu, trvání jeho toku.

    Citlivost metody enzymového imunotestu (ELISA) je přibližně 70%. Nedostatečná účinnost studie je způsobena nízkou specifičností. Dříve byla zvážena možnost použití sérologického screeningu u vysoce rizikových skupin, zejména u osob s posttuberkulózními změnami v plicích.

    Ke zvýšení specifičnosti testu ELISA pokračují hledání specifických antigenů, včetně těch, které byly získány genetickým inženýrstvím: ESAT-6 atd. (Viz výše). Použití přísně specifických antigenů (38 kDa, ESAT) zvyšuje specifičnost. ale výrazně snižuje citlivost analýzy. Spolu s IFA (zkušebních systémů experimentální laboratoře. Např Pathozyme ELISA kit) také poskytuje sady s bočním imunochromatografickým filtrací (Mycodot), stejně jako jiné podobné testy (dot-analýza na membráně) s vizuálním posouzení výsledku testu. Během těchto testů se analýza provádí po dobu 10 až 30 minut; nevyžadují speciální vybavení, vyžadují vizuální vyhodnocení výsledků, což je spojeno s určitou subjektivitou. Tyto metody mají přibližně stejnou senzitivitu a specificitu (70% a 90-93%) jako tradiční ELISA.

    Použití metod imunitní analýzy má určitou hodnotu jako dodatečnou, zohledněnou v komplexu použitých metod, v diferenciální diagnostice tuberkulózy, zejména v diagnostice jejích extrapulmonárních forem. Nejefektivnější metoda ELISA je v diagnostice tuberkulózní meningitidy ve studii mozkomíšního moku. V tomto případě je citlivost analýzy 80-85% a specificita je 97-98%. Existují údaje o účinnosti detekce protilátek proti tuberkulóze mykobakterií v slzné tekutině při diagnostice tuberkulózní uveitidy.

    Indukce syntézy gama interferonu in vitro

    Gama interferon (IFN-γ) je specifický imunitní obranný faktor realizovaný aktivací makrofágových enzymových systémů. Indukce syntézy IFN-y senzibilizovanými T-lymfocyty způsobuje jejich interakci s antigeny mykobakterií.

    Jako antigeny používané jako tuberkulin PPD. a specifické antigeny, získaná genetickým inženýrstvím, zejména antigeny ESAT-6 (časné sekretovaný antigen o molekulové hmotnosti 6 kDa) a CFP-10 (filtrát kultury protein 10 kDa). Genetické inženýrství nebo rekombinantní antigeny chybí v buňkách BCG vakcíny a jiných mykobakterií. Při použití tuberkulinu jsou výsledky indukčního testu IFN-γ srovnatelné s výsledky tuberkulinového kožního testu (přímá korelace). Při použití geneticky modifikovaných antigenů jsou výsledky testů specifičtější a nezávisí na předchozí BCG vakcinaci. Při testování očkovaných osob, které neměly kontakt s infekcí tuberkulózou, je specificita testu 99%. Citlivost testu u pacientů s tuberkulózou se pohybuje od 81 do 89%.

    Testy a diagnostické nástroje byly vyvinuty na základě krátkodobou kultivaci buněk nebo mononukleárních buněk plné krve, izolovaných z krve s antigeny Mycobacterium tuberculosis in vitro s následným stanovením koncentrace IFN-y nebo spočítáním počtu T-lymfocytů, které syntetizují IFN-y v. Koncentrace interferonu syntetizované in vitro byla stanovena pomocí ELISA za použití monoklonálních protilátek vázajících IFN-y. Potom pomocí kalibrační standard IFN-y určené jeho koncentrace ve zkumavce nebo jamek destičky.

    Při provádění testu Elispot byl počet T-limocytů syntetizujících IFN-γ. se počítá na povrchu destičky potažené protilátkami proti IFN-y.

    vývojáři Diagnosticum na IFN-γ in vitro prostřednictvím indukce, který je schválen agenturou pro léčiva a amerických produktů, tvrdí, že test je možné rozlišovat mezi latentní TBC z aktivní tuberkulózy. Proto v oblastech s vysokou mírou infekce není test přímo diagnostikovaný. V naší zemi se však může použít k odlišení infekce tuberkulózy u dětí po alergii po vakcinaci a k ​​posouzení úrovně specifické imunity v procesu léčby.

    V současné době se zkoumá domácí testovací systém pro stanovení indukce syntézy IFN-γ specifickými tuberkulózními antigeny in vitro.

    Imunitní stav a průběh tuberkulózy, imunokorekce

    V procesu léčby tuberkulózy u lidí dochází ke změnám v antigeneze a stavu imunitního systému.

    Údaje o změnách v exsudátech a tkáních jsou do značné míry protichůdné. Jediné, co lze s dobrým důvodem poznat, je to, že u tuberkulárních granulomů je zpravidla zjištěn značný počet aktivovaných T-lymfocytů.

    Má smysl zabývat se dvěma dalšími ustanoveními, která jsou nezbytná k pochopení role imunologických mechanismů při léčbě tuberkulózy u lidí:

    • Pacienti s AIDS mají obzvláště vysoký výskyt rezistence na více léčiv;
    • s vícenásobnou rezistencí na léčiva (a v nepřítomnosti infekce HIV) jsou obzvláště významné poruchy imunity (zvláště spojení T-buněk).

    Když tuberkulóza široce aplikovat různé metody imunomodulaci: se jedná zejména o léky působící především na imunity T-buněk a systém mononukleárních fagocytů (brzlíku hormony, isoforon, likopid, polioksidony et al.). stejně jako celé (zeslabené) mykobakterie a jejich složky.

    Molekulárně-biologická diagnostika tuberkulózy

    Pro metody molekulární biologie v diagnostice infekčních onemocnění zahrnují, zejména, metody založené na manipulaci s genetický materiál bakteriálních a virových patogenů k identifikaci specifického genetického materiálu - DNA segmenty, které mají nukleotidovou sekvenci, specifickou pro konkrétní kmeny typu nebo patogen k analýze specifických DNA sekvence genů, které určují citlivost patogenu na konkrétní léčivé látky, ale také analyzovat funkční aktivitu určitých genů patogenu. Molekulárně biologické techniky byly široce ve vědeckém výzkumu a praktické aplikace v diagnostice a monitorování různých bakteriálních a virových infekcí po otevření v roce 1985, Carrie Myullisom (vítěz Nobelova cena. 1989) polymerázovou řetězovou reakcí.

    Principy a možnosti metody polymerázové řetězové reakce

    PCR umožňuje amplifikovat (množit) in vitro nukleotidovou sekvenci (DNA fragment patogenu) několik hodin v milionech časů. Reakce v přítomnosti jednotlivých DNA řetězců určuje mimořádně vysokou citlivost testu.

    Nukleotidová sekvence určitých oblastí v řetězci DNA určuje genetickou identitu mikroorganismu, což vysvětluje vysokou specifitu PCR.

    Hodnota této techniky pro detekci a vyšetřování vlastností způsobené Mycobacterium tuberculosis biologické vlastnosti mikroorganismu, které mají velmi pomalý růst: čas Mycobacterium tuberculosis DNA zdvojení při kultivaci je 12-24 hodin.

    Princip metody PCR spočívá v zesílení - vícenásobné, miliony časy. vynásobení úseků specifické DNA sekvence v mikrovolumech trubek během cyklické recidivy následujících tří reakčních stupňů, z nichž každá prochází v jiném teplotním režimu:

    • Stupeň I - denaturace dvouřetězcové DNA při zahřívání s divergencí řetězců;
    • II stupeň - komplementární vazba (hybridizace) primerů (primární oligonukleotidy) s terminálními úseky řetězců přísně specifických, zvolených pro násobení DNA fragmentu;
    • Stupeň III - dokončení řetězce DNA fragmentu pomocí termostabilní DNA polymerázy.

    Pro amplifikaci in vitro musí existovat molekuly matricové DNA. čtyři druhy deoxynukleosidtrifosfátů (nukleotidů) obsahujících vhodná dusíkatých bází: adenin (A), thymin (T), guanin (G), cytosin (C); uměle syntetizované primerové oligonukleotidy (primery) tvořené 18 až 20 bazovými páry; termostabilní enzymovou DNA polymerázu s teplotním optimem 68-72 ° C a ionty hořčíku.

    Specificita PCR závisí na volbě fragmentu DNA. V souladu s tím se syntetizují oligonukleotidy z boku osiva. Specificita hybridizace a dokončení řetězce DNA je způsobena principem komplementarity následujících párů dusíkatých bází: adenin-thymin, guanin-cytosin.

    Pro stanovení genomové tuberkulózní mykobakterie komplex nejúčinnější cíl amplifikace ve většině testovacích systémů vybraných fragmentů DNA IS6110, která ve většině kmenů Mycobacterium tuberculosis genomu má významné množství (10-20) opakování, která poskytuje, společně se specificitou, vysoké citlivosti testu. Ve stejné době, kmeny Mycobacterium tuberculosis je popsáno s malým počtem opakování nebo žádnou IS6110 fragmentu.

    Izolace molekul DNA z biologického vzorku

    Pro provedení PCR by molekuly DNA patogenu měly být izolovány z biologického materiálu v minimálním objemu s minimálním množstvím nespecifické DNA a různých inhibitorů enzym-DNA polymerázy.

    Příprava vzorků by měla být prováděna za podmínek, které brání křížové kontaminaci vzorků izolovanými molekulami DNA. Za tímto účelem je potřeba ošetření místnosti ultrafialovým povrchem, podlahami a pracovními plochami stolů a spotřebičů s roztoky obsahujícími chlor. Také povinné použití čistých rukavic, jednorázových zkumavek a špiček na automatické pipety.

    Pro izolaci DNA Mycobacterium tuberculosis z klinických vzorků (mozkomíšní mok, bronchiální mytí) neobsahující velké množství buněk, buněčný odpad, nebo jejich solí, je dostatečné k centrifugovat vzorek 3-4 tis. Otáček za minutu, přidá se do kalu 20-30 ul 2% roztoku Triton X-100 a zahřívá se při teplotě 90 ° C po dobu 30 minut.

    Pro přípravu vzorků sputa musí být efektivní zkapalňování, který se obecně používá pro 4% roztoku hydroxidu sodného a N-acetyl-L-cystein (NALC), v množství 50-80 mg na vzorek - v závislosti na viskozitě vzorku. Roztok NALC se musí připravit ex tempore nebo prášek NALC lze přidávat přímo do vzorku. Po zkapalnění se vzorky centrifugují po dobu 15 minut při rychlosti 3,5 až 4 000 ot / min (3000 g) v 50 ml lahvičkách se šroubovými uzávěry, tj. za stejných podmínek, které se doporučují pro předběžnou přípravu hlenu.

    Pro extrakci DNA z metody pelet se použil nejčastěji založeny na použití 5-6 M roztoku guanidin isothiokyanátu lyzační roztok, jako mikroporézních částic a oxidu křemičitého ( „křemeliny“) sorbovat molekuly DNA. Nespecifické látek, včetně inhibitorů možné, potom se promyje do 2,5 molárního roztoku guanidinium isothiokyanátu a roztokem ethanolu, načež se molekula DNA desorbované vody, a tyto vzorky byly použity k provedení PCR. Pro zjednodušení technologie extrakce DNA se "křemelina" často nahrazuje magnetickými mikročásticemi pokrytými oxidem křemičitým. V tomto případě se použije speciální magnetický stojan pro mikrotubuly místo odstředění, aby se vysrážely částice.

    V Rusku byl vyvinut originální způsob imunomagnetické separace mykobakterií s následnou extrakcí DNA patogenu. Pro Mycobacterium tuberculosis imunomagnetické separaci pomocí ferroparticles velikosti 3-5 um, potažené oxidem křemičitým, s nimiž jsou spojena pomocí chemických vazeb polyklonální (králík) protilátky proti Mycobacterium tuberculosis. Vzorky sputa po alkalické lýze jsou neutralizovány kyselým roztokem tris-HCl a inkubovány s imunomagnetickým sorbentem. Poté jsou imunoferonové částice shromažďovány magnetickou tyčí s vyměnitelným hrotem, převedeny na mikrotubu a vysráženy. přidá se 20-30 ul 2% roztoku Triton X-100 a 30 minut se zahřeje na 90 ° C. Supernatant se používá jako DNA templát pro PCR analýzu.

    Složitým problémem je izolace DNA mycobacterium tuberculosis z biopsických vzorků. Pro enzymatickou biopsii se enzymová proteinasa K použije při konečné koncentraci 200-500 mg / l při teplotě 56 ° C přes noc. Dále je použita jedna ze známých metod. Nadbytečná nešpecifická DNA v PCR analýze biopsií často způsobuje inhibici reakce, která vyžaduje opakovanou extrakci DNA.

    Metody detekce výsledků

    Po dokončení reakce se amplifikované fragmenty DNA patogenu identifikují různými metodami.

    Metoda gelové elektroforézy je dobře známa. Takto získaný DNA fragment byly identifikovány pozitivní kontrola, obsahující požadovaný specifický fragment DNA nebo známé předem velikosti (počet párů bází), fragment, který byl stanoven standardní molekulární marker.

    V přítomnosti specifického barviva je ethidiumbromid zahrnut v dvojvláknové DNA. syntetizovaný fragment DNA je detekován jako pás světelný pod působením ultrafialového záření.

    Velikost DNA fragmentu, stanovená elektroforézou ze vzdálenosti od počátku, musí odpovídat známému markeru molekulové hmotnosti nebo pozitivní kontrole.

    Další způsoby určování výsledků PCR založené na hybridizaci s jediným řetězcem produkty PCR s oligonukleotidem, komplementární k ní - DNA sondy značené biotinem, následnou detekcí pomocí enzymatických reakcí, například vazbou na streptavidin-biotin alkalickou fosfatázou.

    Na základě tohoto typu detekce byly vytvořeny analyzátory PCR, ve kterých se detekce výsledků PCR provádí automaticky jako výsledek odečtení optické hustoty ve vzorcích po projevu enzymatické reakce.

    Nevýhodou těchto metod jsou možnosti intralaboratorní kontaminace poměrně krátkými fragmenty DNA molekul. Když molekuly vstupují do nových vzorků, stávají se matricí pro PCR a vedou k falešně pozitivním výsledkům.

    V tomto ohledu je třeba zabránit falešně pozitivním výsledkům: zavedení přísných pravidel pro separaci a izolaci prostorů: extrahování DNA z biologických vzorků; prostory pro zjištění výsledků (elektroforézy) z čisté zóny. Tyto prostory jsou oblastí s pravděpodobnou kontaminací. Další izolovaná oblast je čistá místnost pro zavedení vzorků DNA, které mají být testovány v zkumavkách s reakční směsí pro PCR. Konečně se předpokládá, že hlavní zařízení - zesilovač DNA - by mělo být umístěno v samostatné, případně kancelářské místnosti.

    Aby se zabránilo kontaminaci produktů předcházejících reakcí - některé testovací systém Likon-amp PCR namísto dezoksinukleozidtimidina obsahují dezoksinukleoziduridin, které, pokud jsou součástí in vitro syntéza obvodu namísto ve správné poloze, to znamená, Dusíková báze tyminu přítomná v nativní DNA je nahrazena uracilem. Uracil DNA glykosylázy se přidá do reakční směsi na analyt, zničí pouze kontaminující fragmenty deoxyuridin, ale ne nativní DNA analyzována.. Následné zahřívání při 94 ° C inaktivuje tento enzym a neinterferuje s amplifikací v PCR.

    Existuje testovací systém založený na izotermické amplifikaci rRNA, pro který se nejprve provádí reverzní transkripce a syntéza molekul DNA. který je zase matrice pro následnou syntézu molekul RNA. RNA amplicony jsou detekovány za použití sondy DNA zachycené akridinem, když jsou hybridizovány v roztoku reakční zkumavky. Tato metoda má kromě vysoké citlivosti výhodu analýzy v jedné trubce, která zabraňuje kontaminaci. Podle autora citlivost této metody v respiračních vzorcích dosahuje 90% se specificitou 99-100%.

    Nové metody detekce jsou implementovány v PCR v reálném čase. Tyto metody se liší primárně v tom, že PCR a detekce jeho výsledků se provádí současně v jedné uzavřené trubici. To nejen technologicky zjednodušuje techniku ​​analýzy, ale také zabraňuje kontaminaci laboratorních místností a testovaných vzorků s produkty předchozích PCR.

    V reálném čase výsledků detekce PCR je v důsledku fluorescence vznikající při fluorogenní DNA hybridizace sondy s amplifitsi Rui-PCR v průběhu specifických fragmentů DNA. Struktura fluorogenní sondy DNA konstruovány tak, že fluorescenční marker je vydána jako výsledek enzymatické reakce nebo vzdálen od molekuly zhášeče fluorescence pouze za specifické hybridizace s požadovanou molekulou DNA, který má být amplifikován v průběhu PCR. Jak se počet molekul sondy hybridizovaly s zvýšení fluorescence je úměrná zjištěné úrovně počtu molekul amplifikovaného produktu. Vzhledem k tomu, při každém počtu cyklů PCR fragment molekuly DNA se násobí o polovinu, číslo cyklu, při které se fluorescence stanovená a zvyšuje nepřímo úměrný počtu molekul DNA v počátečním vzorku. V případě, že reakce je představit jako kalibrátoru několik různých známých koncentrací molekul odpovídajících DNA fragment Mycobacterium tuberculosis, použitím počítačového programu může být vypočítána a množství genomové DNA v testovaném materiálu.

    Každý standardní vzorek je duplikován. Kvantitativním kritériem je minimální počet PCR cyklů nezbytných pro nástup a růst stanovené fluorescence. Na úsečce - počet cyklů; osa je fluorescenční hodnota. Koncentrace DNA jsou nepřímo úměrné počtu cyklů potřebných pro vzhled fluorescence. V pravém sloupci (21-32) jsou označena čísla cyklů odpovídajících koncentrací. Rozdíly mezi 10-násobnými koncentracemi fragmentů DNA 10 2 -10 6 ml - 3,2 až 3,4 cykly. Pro dva pacienty byly koncentrace fragmentů IS6110 asi 10 3 / ml a 10 4 / ml. Vzhledem k počtu opakování (6-20) fragmentů analyzovaných v genomu Mycobacterium tuberculosis je počet mykobakterií v klinických vzorcích přibližně 100 a 1000 buněk.

    Použití PCR při diagnostice tuberkulózy

    Metoda PCR se nejčastěji používá k urychlené diagnostice tuberkulózy - detekce mykobakterie tuberculosis v klinických vzorcích: sputa. bronchiální výplach, pleurální výpotek, moč, mozkomíšní mok, punctates osteolýzy, aspirates ženského pohlavního ústrojí a biopsie jiného. Ve studii v Nizozemí byly studovány asi 500 sputu a bronchiální laváže vzorků od 340 pacientů s potvrzenou diagnózou plicní tuberkulózy porovnat citlivost metody PCR, mikroskopie a studie kultura nátěrech. Citlivost analýzy byla 92,6,88,9 a 52,4%. Specificita všech metod byla asi 99%.

    Srovnání účinnosti detekci Mycobacterium tuberculosis metod stěr mikroskopie, setí na Lowenstein-Jensen médium, testovací systémy VASTES a PCR analýzy. PCR ukázala citlivost 74,4%, mikroskopii - 33,8%, inokulace pevného média - 48,9% a VASTES - 55,8%. Průměrná doba detekce pro naočkování na mediu Levenstein-Jensen je 24 dní. VASTES - 13 dní, PCR - 1 den.

    Jsou také diskutovány možnosti použití PCR jako citlivé a rychlé metody monitorování účinnosti léčby tuberkulózy.

    Detekce Mycobacterium tuberculosis DNA pomocí PCR s účinné chemoterapie určí po delší dobu - v průměru 1,7 měsíce ve srovnání s stěru definovaným pod fluorescenčním mikroskopem, a od 2,5 měsíce ve srovnání s bakteriologického vyšetření.

    Diagnóza extrapulmonárních forem tuberkulózy

    Hodnota jako citlivou metodou PCR je obzvláště velký pro mimoplicní formy, neboť tvoří v těchto klinických a radiografických metod obvyklých bakteriologickými metodami pro stanovení Mycobacterium tuberculosis v diagnostických materiálů neúčinné.

    Při zkoumání vzorků moči PCR výsledky byly pozitivní v 16 z 17 pacientů s aktivní tuberkulózou a negativní močového 4 pacientů neaktivní ledvin tuberkulózy a 39 pacientů s močovou nontubercular onemocnění systém.

    Účinnost PCR analýzy ve studii o aspiracích kostní dřeně u pacientů s horečkou neznámého původu byla prokázána v případech podezření na tuberkulózu. Pro diagnostiku tuberkulózní lymfadenitidy bylo u dětí vyšetřeno 102 odsávacích dýchacích cest a vzorku biopsie 67 dětí s podezřením na tuberkulózní lymfadenitidu. Byly získány pozitivní výsledky: 71,6% PCR v reálném čase. fluorescenční mikroskopie - 46,3%. kulturní výzkum - 41,8%. Ve studii s 50 biopsiemi lymfatických uzlin u pacientů s "škrábnutím" byly všechny výsledky negativní. Byla tedy prokázána 100% specificita PCR analýzy. Ve stejné práci, s punkční biopsií lymfatických uzlin, byla prokázána možnost detekce M. avium.

    Diagnóza tuberkulózy ženských pohlavních orgánů neplodnosti, jak je známo, je jedním z nejtěžších diagnostických problémů. Při zkoumání PCR biopsie endometria, endometriální aspiráty kapalných vzorků od Douglas prostoru 14 (56%) z 25 vyšetřených pacientů laparoskopicky podezření na tuberkulózu, byly získány pozitivní výsledky. Při použití mikroskopie a kultury byly získány výsledky 1 a 2. Tyto případy byly také pozitivní na PCR. Většina PCR-pozitivních výsledků se týkala případů s charakteristickými příznaky tuberkulózy podle histologické studie; menší počet - s podezřením na tuberkulózu podle údajů laparoskopie. Byla získána pouze jeden pozitivní výsledek PCR při absenci údajů o laparoskopické tuberkulózy.

    V diagnostice mimoplicní TB lékařů často vyvolává otázku identifikace patogenu ve studiu vzorků krve pomocí PCR. Literární údaje naznačují, že detekce DNA z Mycobacterium tuberculosis z krevních vzorků je možná s dalekosáhlými formami infekce HIV. DNA mycobacterium tuberculosis byla detekována pouze s generalizovanou tuberkulózou různých orgánů u pacientů s transplantovanou ledvinou a imunosupresí.

    Identifikace druhů mykobakterií

    Metoda PCR může být velmi účinná pro rychlou identifikaci mykobakterií z tuberculosis a některých druhů mykobakterií nontubercular po obdržení jejich počáteční růst. V tomto případě použití PCR může ušetřit 7-10 dní požadované pro pozitivní identifikaci následné kultury. Výzkum PCR je technicky velmi jednoduché, protože nevyžaduje komplikované přípravy vzorků klinickým materiálem, aby se dosáhlo vysoké citlivosti. Ve studii 80 pozitivní v tomto testovacím systému (firmy MB Vasto. Organon) všechny pozitivní kultury PCR byly přísně specifické a udržuje po dobu 1 dne. Pro identifikaci jiných druhů mykobakterií v přípravě DNA patogena kultury hybridizované se specifickými DNA sondami značenými akridin a kmeny zjištěných vzhledu chemiluminiscence prostřednictvím chemiluminometru nebo nitrocelulózové proužky s vizuálním hodnocením po hybridizaci. Při použití takového kitu identifikoval omezený počet druhů: Mycobacterium tuberculosis komplex. M. avium, M. avium, M. kansasii a M. gordonae.

    A.Telenti a kol. také vyvinul relativně jednoduchý a levný způsob identifikace druhů klinicky významných druhů mykobakterií pomocí PCR a následnou reakcí se dvěma restrikčními enzymy (enzymy, které mají schopnost snížit molekulu DNA na specifických místech). Fragment DNA se zesiluje. (65 kDa) a fragment PCR z 439 párů nukleotidů produkovaný pomocí PCR se zpracovává odděleně dvěma enzymy: Bste II a Nae III. Pak analyzovány pomocí elektroforézy v agarosovém gelu získány dva produkty, určení jejich velikosti (počet párů bází) pomocí standardní soubor fragmentů DNA (molekulová DNA markery) v délce od 100 do 1000 párů bází. V každém z těchto specifických typů (M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M. kansasii, M.fortuitum) detekovat dva nebo tři DNA fragmenty různé velikosti pro každý restrikční enzym. Kombinace různých velikostí DNA umožňuje rozlišit tyto druhy mezi sebou.

    Technologie biologických DNA mikroskopů se vyvíjí. což pomůže identifikovat více než 100 druhů mykobakterií v jedné studii.

    Identifikace druhů se může také provádět pomocí PCR amplifikaci variabilní oblasti 16S rRNA následuje sekvenování amplikonů při srovnání s odpovídající primární struktuře, která umožňuje identifikaci více než 40 druhů mykobakterií.

    Pomocí PCR se může také provádět v druhové identifikaci komplexu Mycobacterium tuberculosis, včetně diferenciace M. bovis a M. bovis BCG. K tomu dochází k analýze přítomnosti nebo nepřítomnosti některých genů v genomických oblastech RD1. RD9 a RD10. RD1 chybí v M. bovis BCG, ale je přítomen v virulentních druzích, včetně M. bovis.

    Stanovení citlivosti přípravku Mycobacterium tuberculosis na léky metodou PCR

    Cíle molekulárně genetických metod pro lékové vnímavostí nebo odolností Mycobacterium tuberculosis snížit k identifikaci mutací ve specifických nukleotidových sekvencí známých genů. Základní metody jsou založeny buď na přímém prochityvanii (sekvenování) těchto sekvencí po amplifikaci a hybridizaci DNA fragmentů biotinem značené amplifikované v PCR sond DNA. Obě alternativy zahrnují identifikaci substituce nukleotidů v sekvencích, které používají sondy DNA vedou k nepřítomnosti nebo neúplné hybridizaci na nitrocelulózovou membránu s použitím enzymového konjugátu (streptavidin-alkalická fosfatáza) - Metoda Lípa-Rif-TB.

    Metoda pro měření fluorescence v místně upevněn na mikrovýbrusů DNA sondami komplementárními se známými mutacemi v PCR amplifikovaných oblastí genu odpovědné za rezistenci nebo citlivosti na léky, tzv mikrobiochipov metoda. Hlavní algoritmus pro provádění tohoto výzkumu je následující. Po izolaci DNA z klinického vzorku nebo kultury mykobakterií je nutné provést PCR amplifikaci příslušných fragmentů rpoB genu odpovědného za citlivosti na léky na rifampicin nebo katG a inhA genů kódujících proteiny Mycobacterium jsou zodpovědné za citlivost na isoniazid. Výsledky PCR byly hodnoceny pomocí elektroforézy v agarosovém gelu, ve které potvrdí příjem příslušných DNA fragmentů na požadovanou délku. Pak se provede druhé kolo PCR, aby se do DNA vložila fluorescenční značka. Výsledky PCR jsou opět potvrzeny gelovou elektroforézou. Poté, hybridizace byla prováděna (inkubace přes noc), s následným promytím výsledného materiálu na biočip, který je velký počet pevných do malé skleněné desky krátkých řetězců DNA (sond), které jsou komplementární s nukleotidovou sekvencí typu Mycobacterium tuberculosis senzitivním v místech možných mutací. stejně jako mutantních sekvencí zodpovědných za rezistenci vůči lékům. Umístění DNA sond na talíři - v pravém slova smyslu, a úroveň fluorescence pozorované při hybridizaci k určení výsledku pomocí speciálního čtecího zařízení je instalován. V tomto ohledu jsou výsledky analýzy určeny pomocí speciálního počítačového programu.

    V posledních letech, vyvinout alternativní metody pro stanovení citlivosti na léky, technologií Mycobacterium tuberculosis na bázi PCR v reálném čase, což umožňuje provádět tyto studie v režimu uzavřené trubice.

    Na Obr. 13-13 ukazuje výsledek analýzy klinických izolátů Mycobacterium tuberculosis při určování odolnosti vůči rifampicinu pomocí PCR v reálném čase: 218 - kontrolní vzorek (citlivé na rifampicin); 93 - pozitivní kontrola mutace Ser-Trp TCG-TGG; 4482 - pozitivní kontrola mutace Ser-Leu TCG-TTG; 162-322 - experimentální vzorky. Výsledek výpočtu kinetických křivek amplifikace na 4 kanálech: kanál 1: 393 - pozitivní kontrola pro mutaci Ser-Trp TCG-TGG; kanál 2: 4482 - pozitivní kontrola mutace Ser-Leu TCG-TTG; 162, 163, 172, 295 - experimentální vzorky; kanál 4: kinetické křivky amplifikace všech vzorků účastnících se experimentu. Pozitivní kontrola amplifikační reakce. Závěr: Výsledky analýzy byly zjištěny následující mutace, které určují odolnost vůči rifampicinu: ve vzorcích 162,163,172,295 - Ser-Leu-TCG TTG. Stejný princip se používá pro stanovení odolnosti vůči isoniazidu na genech katG a inhA, stanovení nejčastější mutace.

    Identifikace kmene mycobacterium tuberculosis

    Nejvíce důkladně studován způsob identifikace kmenů Mycobacterium tuberculosis je technika tzv polymorfismu délky restrikčních fragmentů (RFLP RFLP,., Nebo v anglickém znění), a který je založen na fragmentirovanin (omezení) z Mycobacterium tuberculosis DNA enzymem PvuII a fragmenty získané následnou hybridizaci s určitými specifickými sekvencemi na DNA jeho opakovaný prvek IS6110. Vnitrodruhová variabilita realizováno různými počty opakování IS6110 a jejich umístění na DNA. jakož i různých vzdáleností mezi určitých místech restrikční útok enzymu (restrikční místa) a prvek IS6110. Tato technologie je velmi složitá a časově náročná. Po ošetření DNA extrahované z kultury Mycobacterium tuberculosis, gelová elektroforéza se provádí s restrikčním enzymem, a pak se přenese DNA fragmenty různé délky na nitrocelulózovou membránu, hybridizace byla prováděna s fragmenty IS6110 prvku a detekována pomocí enzymatické reakce. Specifické DNA proužky výsledný vzor charakterizuje konkrétní kmen Mycobacterium tuberculosis. Pomocí počítačové analýzy se zjistí identita nebo příbuznost kmenů. Navzdory skutečnosti, že metoda RFLP je nejvíce diskriminační, tj. identifikuje největší počet rozdíly v analyzovaných kmenů, je neúčinné pro malé množství (méně než 5), IS6110-repetic pozorované u některých kmenů. Na Obr. 13-14 znázorňuje výsledky RFLP typování kmenů.

    Alternativní způsob může být spoligotypizace (spoligotypizace) - analýza DNA polymorfismu sekvence spaceru - mezilehlé mezi přímými repeticemi DR-oblasti. Při provádění spoligotypizace kmeny provedeny PCR s primery DR-omezující část, načež fragmentů různých délek jsou vytvořeny, které hybridizují s variabilními mezilehlých částech DNA. Analýza distančních sekvencí oblasti DR je prezentována. Podle výzkumníků, více jednoduché, účinné a vhodné pro primární screening kmenů a předběžné analýzy epidemiologických a klinických studií přímo materiálu.

    Je zřejmé, že efektivnější a technologicky dostupnější metoda je VNTR (zkratka anglických slov) nebo metoda pro určení variabilního počtu přesných tandemových opakování v DNA mycobacterium tuberculosis. Tato metoda je založena pouze na použití PCR a nevyžaduje další manipulaci. Jelikož počet tandemových opakování v různých kmenech a na různých místech se liší, stanoví se fragmenty různých velikostí a analyzují se na výsledné elektroforem PCR produktů. Podle vědců dosahuje používání VNTR větší stupeň rozlišování kmenů než metodou RFLP.

    Velká pozornost v posledních letech uvedeny na šíření kmenů Mycobacterium tuberculosis rodiny W-Beijing (někdy nazývané Peking kmen), které mají významnou část lékové rezistence.

    Základní požadavky na kvalitu molekulárně biologického výzkumu

    Základní regulační dokumenty pro PCR

    Objednávky Ruské ministerstvo zdravotnictví: №45 od 02.07.2000 g.. číslo 109 z 21.03.2003 g.. číslo 64 z 21.02.2000, pokynů: 1.3.1888-04 „Organizace práce ve studiích s použitím PCR materiálu infikovány patogenním biologický činidla skupin III-IV patogenní "; 1.3.1794-03 "Organizace práce při studiu materiálu PCR infikovaného mikroorganismy patogenních skupin I-II". 2003; 3.5.5.1034-01 „Dekontaminace materiálu, infikované bakterie I-IV patogenity skupiny při použití PCR,“ 2001 dodatku 11 k jednotné pokyny pro mikrobiologické vyšetřovací metody v identifikaci, diagnostiku a léčbu tuberkulózy.

    Zaměstnanci

    Provedení molekulárně biologickém výzkumu může držet doktory klinické laboratorní diagnostiky, lékaři bacteriologists, virologists, lékaři, biologové, klinické diagnostické laboratoře, stejně jako specialistů se středním vzdělávání lékařů, prošel specializaci a pokročilý výcvik v předepsaným způsobem.

    Uspořádání laboratorních prostor

    Vyžadují se následující laboratoře:

    • Oblasti pro manipulaci s vzorkami je laboratoř přizpůsobená pro práci s infekčními agensy patogenních skupin III-IV podle metodických pokynů 13.1888-04.
    • Zóna pro přípravu reakčních směsí PCR - laboratorní místnost, která zajišťuje ochranu před interním laboratorním znečištěním - "čistou" zónou.
    • • Pokud se k analýze produktů PCR používá elektroforéza nebo hybridizace. laboratoř místnost, ve které jsou vynásobený fragmenty DNA se extrahuje z trubek a zesílení, v tomto pořadí, se může dostat do životního prostředí, v souladu s požadavky na PCR laboratoře (1.3.1794-03 pokyny, vedení 1.3.1888-04) musí být plně je izolován od prostor uvedených v předchozích odstavcích. Mělo by být vyloučeny z pohybu zóny k zónové elektroforézy pro zacházení se vzorkem a „čistou“ oblasti jakéhokoli personálu, zařízení, použitých materiálů a předmětů, stejně jako přenos vzduchu ventilačním systémem, nebo v důsledku průvanu. Tato oblast není požadována pro fluorimetrickou detekci produktů PCR.
    • Prostor pro dokumentaci a zpracování výsledků je vybaven počítačem a potřebným kancelářským vybavením. Tato místnost může obsahovat vybavení, které umožňuje detekci produktů PCR bez otevření trubice. - fluorescenční detektory PCR a tepelné cykly pro PCR v reálném čase.

    Hygienické požadavky na základní zpracování sputa, jsou podobné standardním mikrobiologickým požadavkům pro práci s Mycobacterium tuberculosis.

    Dokončení laboratorního vybavení pro diagnostiku PCR

    Laboratoř obsahuje vybavení pro následující místnosti.

    • prostor pro přípravu vzorků, obsahuje následující vybavení: laminární kryt třídy II "SP-1.2": pevný termostat s topným krytem pro zkušební trubky typu "Eppendorf"; mikrocentrifuga při 13 000 ot / min; odstředivka (Vortex); chladnička s teplotním rozsahem od -20 ° C do +10 ° C; pipety s proměnným objemem řady "Rroline"; čerpadlo s odlučovačem OM-1; stativ pro pipety; stativová pracovní stanice 200x0,5 ml; stativová pracovní stanice 50 x 1,5 ml; Stojany pro ukládání zkumavek 80x1,5 ml;
    • Přípravná místnost pro reakční směs: ochranná komora PCR-box ("Laminar-C, 110 cm); odstředivka - Vortex; Pipety s proměnným objemem řady Proline; stativ pro pipety; stativová pracovní stanice 200x0,2 ml; Stojany pro ukládání zkumavek 80x1,5 ml; chladnička s teplotním rozsahem od -20 ° C do + 10 ° C;
    • prostor pro elektroforézu: kamera pro horizontální elektroforézu; napájení; transilluminator;
    • DNA zesilovače nebo analyzátory nukleových kyselin (PCR v reálném čase) s počítačem a softwarem; mohou být umístěny v libovolné volné místnosti. Pokud se používá technologie PCR v reálném čase. prostor pro elektroforézu není potřeba.

    Externí kontrola kvality

    Aby byli věří v získání objektivně spolehlivých výsledků, měly by se laboratoře účastnit systému externího hodnocení kvality laboratorního výzkumu.

    Účastníci systému kontroly kvality obdrží; 12 lahviček lyofilizovaných bakteriálních buněčných suspenzí, z nichž dvě obsahují E. coli E. kokosové vlákno, 3 lahvičky s Mycobacterium tuberculosis (avirulentní kmen) v 10 2 / ml; 3 ampule s buňkami podobného kmene v koncentraci 104 / ml; 2 ampule nontubercular Mycobacterium avium-intracellulare M. a M. kansasii v koncentraci 10 5 / ml.

    Distribuované testy pro externí hodnocení kvality jsou předběžně testovány ve dvou nezávislých laboratořích s rozsáhlými zkušenostmi v této oblasti.